慢病毒超速离心沉淀法

bishengrong2011

超速离心沉淀法% \' B' |+ q; M. D7 g% H# T
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1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。, S/ u2 k1 Y! T( z
2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。
. Z: @! R" Q! l2 d4 A5 |: k+ X: g3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。3 ]# u8 w0 a6 V# t" q' [  s
4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。8 A9 A( t1 x0 D
5. 按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中。; m) ^" p- f1 s7 W# O6 H3 @
6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时。
3 d) j/ y" y# \! I7. 小心将管子从转头中取出。倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。3 E# ]5 b! U& c9 G8 W3 w
8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀。6 u3 ]( {" u' c0 G. ]
9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。
/ b8 Y( j- {. \" c$ x, P+ z( w10. 在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。! R' B2 ^. _5 K0 T+ D0 [
11. 4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。
4 c' }" d% H0 b12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。
/ r$ j6 w, D4 i$ ?% ~- N; g. y7 h13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。