慢病毒超速离心沉淀法

bishengrong2011

超速离心沉淀法
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1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。8 X( ]2 ?8 v6 i
2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。, E$ V$ F- k9 F5 A- @  w  |
3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。4 M4 y6 C7 x8 t* {: _. F
4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。% J- m5 q: i" {+ b
5. 按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中。( ^. V* `- O( \; x4 ~
6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时。
6 k2 W' Q3 L1 B9 i7. 小心将管子从转头中取出。倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。5 D# ^7 p8 {; s. M. J
8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀。
4 k! U" e5 K2 @# C8 U4 D9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。# W- b  G* D! c( z: {
10. 在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。9 S4 Q* b" q( d
11. 4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。3 g5 t) k6 Y% N. F2 F- M
12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。
0 I( p. Z* A8 c13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。