慢病毒超速离心沉淀法

bishengrong2011

超速离心沉淀法
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$ ?' |- V3 f$ z# K1 b- k& E" f1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。
+ t$ @; w6 b% }3 i! W# ]$ n2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。2 y% }1 W: e+ X6 H/ G
3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。
. |7 F% M2 l( I& J9 s# {4 r4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。# d. ?7 x' e4 M4 \
5. 按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中。- ]# q+ y7 e- s: x
6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时。
5 D& g! H- ^4 \, \7. 小心将管子从转头中取出。倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。  l! [5 ~& X9 t
8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀。
- M. S4 J" _# c9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。
/ h6 n. _$ p' \  Y7 q1 O10. 在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。. Q4 j8 x1 k1 I% G% B/ d
11. 4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。) U5 |( D5 C) ~( [8 w
12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。
( v/ v# u! D5 z, {( U, f& _13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。