慢病毒超速离心沉淀法

bishengrong2011

超速离心沉淀法, e! L% [: P# f1 W( [- _

0 N0 X. {5 h& @7 m4 g$ T$ _+ G! f& h, w, Z1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。
( w1 Q& X2 J% y/ G9 ^2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。9 S, o$ H% Y! K; t4 e
3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。- K2 F$ G- X6 f* {& ?+ B& _3 _$ d" b
4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。* M: B3 {4 \! l% F) E' L
5. 按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中。
9 J" T  f- b9 ~, Q6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时。
$ p* d9 K4 y6 m8 d$ h7. 小心将管子从转头中取出。倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。
8 b* a& y& o& D( k5 [8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀。
& {* M' D+ U# F8 i$ V9 t9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。0 M2 Z2 M6 V% L' Z: r
10. 在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。
# R" _; u$ \- o5 d5 `; V11. 4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。
5 V& P/ G, X6 t  Y12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。
9 I- a2 _& I- ~4 K: O13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。