慢病毒超速离心沉淀法

bishengrong2011

超速离心沉淀法2 N1 {: P7 E3 f+ J9 W4 V4 D
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1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。
0 t+ ^4 O8 I1 a: d; ^3 O, \% Q2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。
6 w+ K! d; o: _' [, `6 ~3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。" }* y- ]% b2 t/ I
4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。  u! b2 Q7 o9 [, o; p7 g# _6 j
5. 按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中。- [# c) ], F- D2 g, Y6 w( R
6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时。% X1 W/ \# S: V  O4 X
7. 小心将管子从转头中取出。倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。. b- z  z# u1 H; C
8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀。
8 p% x; x0 Q! a8 I6 ~& \  H9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。; \- W6 U# N6 d1 x+ S) n( x
10. 在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。% H8 d& o0 {. {8 U
11. 4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。
, O4 `6 b( w) \12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。
9 t( ]% c" h; [7 r2 ]13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。