慢病毒超速离心沉淀法

bishengrong2011

超速离心沉淀法. k8 l4 `- D# s1 v; O3 C' [  R( \
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1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。
! g9 M+ _0 H+ z0 \7 w+ T2 H2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。
9 I* h  Q' w" f% N# T9 k3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。
/ ?) A- j4 h8 L4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。; {/ o) F' W. S. p$ a8 w$ y( |
5. 按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中。" H0 |) ]3 i( x. ~; z
6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时。& ~3 G1 D/ ?+ T' A
7. 小心将管子从转头中取出。倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。
5 x& f2 B0 w6 D8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀。$ p. [! R; ]) g
9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。
. s# X& Q) M9 s0 s: p10. 在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。
' t  \# j, I4 q. X1 t1 }11. 4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。
$ H  {+ U; F8 |# z4 k12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。
2 m. m5 [# K  L$ X* f13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。