CIK培养中的细胞因子添加顺序问题！！！

lyj-0017

      传统培养方法都是D0添加IFN-r，D1添加IL-2和anti-CD3 mAb，这个工艺大家一般都是首先在培养瓶中培养，几天后转培养袋或继续使用培养瓶培养。
" M/ V' b  T$ b- u. I3 B    问题1：传统工艺为何必须要首先添加IFN-r，24小时之后添加后两种细胞因子？可不可以在D0天同时添加IFN-r、IL-2和anti-CD3 mAb呢？, p/ F% v, p% |3 A7 y& \, N
    问题2：是否可以分离出MNC后直接转入培养袋添加细胞因子进行培养呢？4 M/ ]6 r7 Z+ W% H7 D/ Q! K
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    期待高手不吝赐教啊~
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jxydiandian

之前看过一篇文献，说第一天加IFN-r是为了增加细胞表面的受体对IL-2的结合率，并且增加细胞的细胞毒性，大概是这样，因为是好久好久之前看的文献了，不太记得了，回答有失严谨，请见谅。

jxydiandian

对于第2个问题，是否在培养袋直接培养要看细胞数量的，如果细胞数量太少，在培养袋培养，细胞密度太低，不易于增殖

jxydiandian

补充：在诱导CIK细胞形成过程中加入IFN-γ可降低IL-2 用量,同时IFN-γ加入的顺序与细胞毒活性密切相关, 先加入IFN-γ后加入IL-2 可提高细胞毒活性, 这是因为先加入IFN-γ, 可促使PBMC上IL-2 受体数量增加,从而有效地激活效应细胞

lyj-0017

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/ `. ?1 H$ |8 T; G+ v: w$ Q
如果细胞数量够多呢？比如使用血液分离机分离单个核细胞，这样分离得到的单个核细胞相对较多，这种情况下是否可以三种因子一开始时就同时添加呢？

jxydiandian

回复 lyj-0017 的帖子' @0 a2 u# w1 k: ?  F; E" P7 t

6 ~+ P) O, |& `, m! |4 I: ]/ t. r我觉得你应该把我的回答在看一遍

chslyx

回复 lyj-0017 的帖子' z0 f9 u) Q+ Z9 I. }" s, |
7 w5 [6 g5 F$ L
第零天加IFN-R是为了增加细胞毒性，前二十四小时主要是诱导细胞的毒性，加了IL-2的话会影响诱导的效果，，而问题二主要是因为细胞密度问题，因为刚分离出来的MNC会比较少，用培养瓶会增值比较快，因为细胞聚集的话更容易增殖

lyj-0017

回复 jxydiandian 的帖子" {% {( x0 r: I

4 v) w& g$ `$ t, k, f不好意思哈，一开始没有深刻领悟你的话，现在明白了。那你认为转袋的细胞密度应为多少比较合适呢？

jxydiandian

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3 b  b; @  w( _
/ j- G% V; J4 o3 ]/ Y) ^转袋的密度跟瓶扩的密度是一样的，差不多还是按0.5-1*106/ml密度吧

lyj-0017

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6 ~" u& K% C' x+ q+ Z& Q& H( g% x1 e( R1 O$ @. ]+ @. R
嗯，最近就按照这个密度试试，非常感谢啦~