请教在胚胎干细胞培养过程中去除分化的细胞的方法

星光灿烂

传代时不离心，让细胞团块自然沉降，小心吸掉上清，重复三次，也可以除掉分化的细胞

qq007www

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& o  F; z: j, x; Y- N+ N; k为什么传代时还用离心啊？你们实验室用的是什么酶啊？不能终止吗？

qq007www

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让细胞自然沉降对细胞状态影响大吗？

qq007www

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好吧，鉴于我们实验室的条件，我回去试试，在挂完细胞后是不是要补很多FEEDER 啊

星光灿烂

我们用的dispase酶，主要用于消化细胞团快，不是哺乳动物来源，效用比较温和，稀释就能灭活。
4 ^1 k9 ~& Q9 `/ h0 u细胞传代我们都是离心的啊，不离心是怎么做的我不是很清楚，用dispase酶消化下来之后稀释五倍或五倍以上，离心800rpm，然后弹散细胞，加ES培养基，将团块小心吹打至合适的大小，1:6或者其他的倍数接。

星光灿烂

自然的沉降对细胞的活性影响不大，ES细胞不是以团块消化下来的嘛，那大的团块自然就比分化的单细胞沉降的快，这样反复沉降几次也可以去除分化的细胞，但是这样可能去除的不完全，所以分化不严重的时候可以用

memory

可以用酶消化法解决这个问题

mtdj1314

在显微镜下圈出分化区域，然后用tip头边刮边吸，这样就可以去掉分化细胞啦~

郁金凤

我们实验室是在显微镜下用2ul枪头直接把分化的细胞刮除掉，当然技术要求高点，多练练就行了，对细胞损伤也较小

hustdreamer

我们是这样的，先在显微镜下面将分化的细胞团块用mark笔圈出来，然后用吸泵套上黄枪头将所有圈出来的部分吸走。如果圈出来的比较多，要注意不断摇晃培养基防止细胞干掉。可以在显微镜下面观察一下分化的细胞吸干净了没有。如果洗干净了，就可以将剩余培养基吸走。然后换上新鲜的培养基。