FGF、EGF悬浮培养出来的细胞球，就是干细胞吗？

changbaihou

肿瘤细胞原代，用FGF、EGF悬浮培养出的细胞球可以认为是肿瘤干细胞吗？6 F2 E/ y2 e& O4 L# x0 f
普通细胞在这种液体里都不能存活吗？
9 ^2 i# ~- d' |( D' a2 i2 J+ I- E需要怎样证实？

minshuyin

这个需要多读文献啊 一般养干细胞都需要添加一些因子的
, u/ }) x: j  m9 W) P% Q普通细胞应该也能存活
' ?$ z& n0 D$ [6 v最简单的需要做PCR证实，要不就染色 染肿瘤干细胞特异性marker

yuanshenyewu

不是啊，成纤维也能成球

changbaihou

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) u% X. \# {' X; b6 S% B
! `0 A7 Q& T9 t6 k) c, w2 N) O3 A做PCR或染色证实的话，没有阴性对照组啊。
$ t# k2 s& t& d6 L5 ]( ^这个问题怎么解决？

changbaihou

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, L3 p$ {! M+ l$ f那怎么证实？见我楼上的帖子

yuanshenyewu

我发现干细胞的marker是可以经过一段时间养出来的，就像一些成纤维细胞（旁分泌作用）加一点别的干细胞，养一段时间可能也会表达CD133,CD90,满是疑惑

changbaihou

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+ i/ D- F, b! Y& A! p6 ?
7 B, z. A0 k$ w' ~# e你有阴性对照吗？是不是假阳性的问题？
% F5 E3 t3 n! x% ~3 \( B/ w3 G0 ?
1 `5 A4 u6 e1 w" n另：请问你是如何给干细胞染色的？先让干细胞贴壁再染色吗？还是直接染细胞球？' V5 E7 z6 y, @8 A* d

yuanshenyewu

都做过，直接染的话，细胞都是大红大绿一片，因为是立体结构，很难用光镜对准焦距，要是能做共聚焦就好了，可惜没尝试过啊

changbaihou

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9 B( V) N7 o$ J8 I& r" z) y- }+ B0 A% |9 y+ P5 m
请问让细胞贴壁再染色的话，你要在poly-lysine包被的器皿中培养多长时间后再染色？
1 ~  k2 S9 ^4 g& S' ?  Z8 u
1 C5 u7 G/ O8 M+ H有人说细胞放进去1个小时后，就爬满底部，可以染色了。还有人说可以把整个细胞球放进去，细胞自己会散开贴壁。

nydfy

肿瘤干细胞的鉴定是有金标准的：成球只是其中之一，但成球只能证明它具有肿瘤干细胞样细胞，如果要证明细胞具有肿瘤干细胞特性，还需要进行裸鼠成瘤实验，如果能形成二代瘤，且经过HE染色证实肿瘤细胞具有异源性（不同种类的细胞），表明细胞具有肿瘤干细胞特性。