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回复 小兔子lp 的帖子0 R/ A+ p( B) E7 e3 |$ G
$ E! `, K' [1 _: P8 q: l7 v妹子呀!设计引物重点不是看你能否将设计的引物正好配对上去,重点是要看如下几点:
3 U5 {2 y5 g) g# h# t(1)希望将自己的PCR产物连入载体中,是不是要解决酶切位点的问题。如果不用软件,随便弄两个酶试一下,万一他们的识别位点在你的基因序列之内,怎么办?那不就切烂了吗!
& a! L, A6 F8 g# \0 B(2)不用软解分析,假如使用的酶在序列中没有酶切位点(走大运了!),但是保护碱基添加的数量或者酶切位点序列的添加不对,造成移码突变,等你连到慢病毒载体上,就是不表达蛋白,那就洗洗睡吧!
5 O: x1 p/ E o* U# T& S* x(3)万一自己的实验需要某种标签,来指示自己蛋白的成功表达,可惜妹子没有在意基因序列之后标签蛋白的感受,自己弄一个就可以了,如果造成后面蛋白移码突变,标记就在也不想理你了!所以要学会使用它呀!可以多问问你的师兄师姐。 |
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