脐血单个核细胞分离出现很多白色沉淀的问题

lyj-0017

回复 tianangelt 的帖子9 r) r' [7 A6 R2 d
) T( @) f; C. k! Q9 C4 W; X
确定这一次做密度梯度离心的转速都与以前相同吗？另外，能否说一下你吸取白膜层的具体操作？该图看上去像是血小板过多！

feifangli

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( {/ G# Q' [$ I) X6 g可能是操作中的问题。

tianangelt

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+ v4 G' X# d1 [, s' i0 |9 R
6 m( ~! B7 i  y( c是的，转速都是一样的，吸取白膜层时为了避免丢失，在白膜层的上下液面都会多吸一点，和之前的操作也是一样的。如果是血小板的话，细胞培养的过程中会慢慢消失吗？

lyj-0017

回复 tianangelt 的帖子) ^6 S6 w/ w+ j9 p* i# w  x( ?

7 r5 z0 [- x' l$ E7 ^0 `  m应该就是在上面多吸的那一点点的问题，血小板在以后的培养过程中应该是可以慢慢裂解掉的，就跟单个核细胞中的单核细胞、巨噬细胞会死掉一部分一样，但是也不能忽视一个问题就是，血小板中含有一些凝血因子，不排除会使细胞聚集的可能，个人理解啊~

tianangelt

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" @- [0 s8 Q1 j4 M' z( x8 E1 d
& I& F5 x  Z) _# S$ V* ?" b; h平时分离偶尔也会有一点杂质，但那次分离超级多，后来细胞转移到另外一个瓶，培养了一段时间，没有加因子，只加了点血浆，细胞生长状态挺好的。

zsc78

先检查一下Ficoll里有没有类似的东西或者是否过期。再检查自己在实验操作过程中是否有问题或污染。

gzeb

看图似乎白色物挺多的，试试低速离心能否除去，少量杂质没什么影响的。还有这个应该跟你的操作有点关系，一般在梯度离心完吸取的时候要特别小心，就吸取中间那一层细胞，也许你为了能得到更多的细胞而多吸了其他一部分溶液，这样反而带入更多的杂质，如果离心效果好，杂质少，效果不好，就是你这种情况

tianangelt

回复 gzeb 的帖子3 q. J* ^$ `6 H" ~( F# V- E

, m& |4 k/ Q$ V  X$ L0 C, d' k最近Ficoll离心完后的白膜层，和上层液面的分界很明显，但和下层没有明显的一个界面分层，偶尔有分界比较明显的。这个是操作的原因吗？每次的转速都是一样的。

gzeb

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/ [4 K( m1 Z5 f你转速多少，多长时间？

tianangelt

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; z0 r! t$ N/ w) @2500rpm，20min