NSC原代培养及传代相关问题~~~~~求教

ss安雅熙

最近在做新生24h海马神经干细胞的培养遇到如下问题，希望有高手解决！, ]+ J  d/ ]4 G+ l
原代：1、关于取材部位：是取海马还是皮层的干细胞好培养呢？, z9 z! r4 \% F1 b( h6 e! ~( j
           2、原代消化：我现在用0.125%EDTA-胰酶消化15分钟，效果不错。有人建议光用胰酶消化，请问两者哪个更好些？  c3 c$ E+ H( u
           3、终止培养：我用10%FBS终止但是还有离心洗一下，对细胞有损伤，有没有更好的办法？有人说用NSC全培终止可以么？原理是什么？
5 {) a! _: B& c" x3 T          4、培养密度：我3*105/ML接种到小培养瓶（底面积25）子里神经球长的不是太多，但是提高密度成球太快而且都聚集一起，请问大多密度接种较为合适？
0 ?4 [1 V. E2 b* L传代/ k1 J9 ~: w8 S+ J4 m; v/ H
         1、我差不多4、5天传代。看帖子说有的就机械吹打，可是我的干细胞怎么吹都吹不散，后来改用0.125%EDTA-胰酶消化15分钟才可以成单细胞，前提是还必须用PBS洗2遍。这样操作传代的损失很多细胞，我有的时候7、8小瓶才能传一个6孔板，忘告诉告诉小妹一声，怎么传代为好，感激不尽啊~~~~~~~. O' F8 l- D2 v  j: c8 x
    后续还要做神经干细胞诱导分化还要好多问题 望有人一起讨论

yaolinzhang

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: s$ t/ C1 Z4 l0 U9 _5 M1 O8 }& }+ r
9 X7 O! `0 b) P; W7 d& m) k问题有点多，尝试一下：
. `1 G: V6 x+ X7 A1.个人认为海马的比较好，细胞多，再生能力强；+ _, y0 f6 y* C$ b& K2 X5 r
2.按你自己的做，出现问题再做trobleshooting；6 }& x2 z; a5 A' @2 _
3.终止就行；
  N' }9 Z8 m! X5 ]5 U4.试试6×105；) D' p; P% q+ S: U% N7 N9 ]
5.建议用你自己的胰酶消化法，至于PBS冲洗，一般都会损失细胞，不行你可以只洗一遍试试。

ss安雅熙

有没有高手可以回复一下

enderao

你好，我是准备养神经干细胞，不过刚刚开始作动物模型，还没有提取神经干细胞，很多人说用脊髓的神经干细胞比较容易，你感觉呢，以后有什么心得咱们都可以交流下

细胞海洋

回复 enderao 的帖子
% I* Y+ w" l( x" b+ j* s$ K% S/ o+ m) d
你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样  l' W3 f$ t& i  t( ]3 O
, ]8 @& q: C& W: R. {' t/ c* L
否则他会看不到

碧落

用GBICO的accutase消化比较温和

pengxuleo

回复 ss安雅熙 的帖子: J/ _1 {9 o; R8 l
" d8 F$ `* j& W( n. y2 i
关于神经干细胞的传代，不需要消化成单个细胞，只要将神经球分散能小的神经球就可以了，这样细胞长的会好些。像你说的7、8瓶传一个6孔板，说明你细胞还是太少了，也许你传代传早了。