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懵懂干细胞

版主

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优秀版主帅哥研究员积极份子小小研究员金话筒

楼主

发表于 2013-12-9 22:18 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

本帖最后由懵懂干细胞于 2013-12-9 22:19 编辑
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胞友们好，帮我出个主意吧，半干转条件，假设我的胶是6*5cm大小的，用的是1.5mm的10孔梳子，上样量30uL ，蛋白大小100KD，请问你们用什么样的半干转条件啊，用的是什么缓冲液？上下滤纸张数对电转时间有没有影响啊？谢谢

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沙发

发表于 2013-12-10 10:52 |只看该作者

半干转用甘氨酸+甲醇的缓冲液就行了，一般30分钟，分子量大的蛋白质可以稍微加10分钟看看。滤纸用原装的厚滤纸胶膜两边各一个，为了重复使用厚滤纸，我们一般在胶或膜与厚滤纸直接加同样规格的普通薄滤纸。电压15V，记着电流不能太大，200mA 以内算正常。

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sunbird

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藤椅

发表于 2013-12-13 12:50 |只看该作者

半干转用Tris-Glycine+Methanol缓冲液
普通中性滤纸，胶膜两侧各3张，制作“三明治”前滤纸及膜浸泡3-5分钟。
电压：“三明治”面积乘5，厚度为1.0的胶转膜时间beta-actin一般转膜30-40min，100k一般转膜70-80min厚度1.5的胶，转膜时间稍微延长10min左右。/ Q- E3 _" w* s$ P% T
转膜时间长时，中途可适当加入转膜液湿润“三明治”两侧滤纸。
4 S7 T: m- d6 k5 s2 N7 e9 s
Good Luck !!!