CIK冻存液配制？在培养基是先加“血清”还是先加“DMSO”

sunny.yc

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4 N: p) I0 I; C7 o4 e如果还要给人用的话，用FBS合适吗？

jojo1988509

培养基：血清：DMSO=5:4：1，先用培养基重悬，然后加含有20%DMSO的血清（4度预冷），DMSO对细胞有一定伤害，缓慢加入，血清可以起到保护作用，如果你不加血清直接往培养基里面加DMSO，你会发现培养基浑浊了……蛋白质变性了，就不能用了。

xinquan15

冻存液可以20％血清，7-8％的DMSO，其余为培养基，在配置时，分两种液配制一个是冻存液1，培养基：血清：DMSO=45：40：15;另一种是培养基2；配制时培养基中加入血清，缓慢加入预先低温处理的DMSO,边加边摇晃；每次冻存时先用2液重选，按1:1比例加入1液，逐滴加入，边摇边加。

xinquan15

细胞冻存液成分包括培养基，血清，血清：DMSO最终比例为血清：20％，DMSO7-8％，先配制成冻存液1和冻存液2两种液体，1液成分为培养基，2液成分比例为培养基：血清：DMSO=45：40：15;配制时在培养基中加入血清，然后缓慢加入预先低温处理的DMSO,边加边摇，冻存时，先用1液重悬细胞，再逐滴加2液，边加边摇。

星空雾雨

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4 }! M3 |+ V+ Z9 X# [复苏的话 多少细胞一瓶 浓度多少，还有复苏后直接加在1640培养液中离心吗？

sewing

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我们一般4或5管冻存管复苏后放一个培养瓶培养，复苏后加在1640培养液离心就好~

星空雾雨

回复 sewing 的帖子* B1 P3 z' P. W  d3 w

2 K4 L- @# w% y5 v/ h: G( s" b* \谢谢！冻存时每管多少细胞，然后4或5管复苏后加多少培养液  需要保证细胞浓度在多少范围？

sewing

回复 星空雾雨 的帖子  z0 k. A# {' ?, h
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1mL冻存管里面的细胞密度为0.5-1×107。冻存管解冻后将细胞悬液洗到离心管中，加入适量培养基离心洗涤，以去除DMSO，根据离心后细胞沉淀的量加入适量的培养基，没有说细胞密度一定要在哪个范围。一般我们培养细胞的话培养瓶里面的细胞密度50-80%是恰当的，密度太低了，细胞和细胞之间的联系会减弱，不利于生长，密度太高了，细胞和细胞之间会出现接触抑制，同样不利于生长。

sewing

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“冻存管解冻后将细胞悬液洗到离心管中”这句话打错字了，应该是“冻存管解冻后将细胞悬液吸到离心管中”，不好意思哦~

18605313076

一般用FBSMSO=9:1或者培养基：FBS：DMSO=7:2:1。先加血清，然后一滴一滴加入DMSO，一边加一边晃动离心管，防止产生絮凝。