2014年 Nature scientific reports上的一篇关于“重组蛋白诱导iPSCs”的读后感

xray19

wanglimaomao 发表于 2014-4-1 17:02
/ @" g9 M; X# Q7 J9 _我对蛋白重编程不是很了解。但是针对不能扩增传代有点想法。也不一定正确，欢迎批评指正。首先体外合成的蛋 ...

, k) P' J$ ^  v1 J$ \1 L
即便将4个基因整合到基因组中，当细胞向ipsc转化过程中，外源表达的基因会逐渐被沉默的，直至最后完全沉默。与此同时，细胞内源性的干性基因会逐渐获得表达。

xray19

感谢楼主，我也提供一篇protein transduction induced ipsc 的文章，供大家讨论

Andyhigh

xray19 发表于 2014-4-5 23:06
: }' X( Z# M) j感谢楼主，我也提供一篇protein transduction induced ipsc 的文章，供大家讨论

; z" U( ^* O. G/ S& B9 ~# M最好上传下文章！！！

xray19

' `. w8 _5 S0 h不好意思，昨天没上传上去

Andyhigh

xray19 发表于 2014-4-6 11:56 6 t# i# }$ o# @3 s# s7 _
不好意思，昨天没上传上去

/ A5 k8 ?3 i) O7 z7 ]0 a/ }您是本文作者嘛，很希望您能对本篇文章进行总结和评价！6 S2 S/ |4 A& l
我刚大致看了下，这里与大家分享下我的看法，希望能起到抛砖引玉的作用。% O! b5 o* s) }8 b& u- g; l- s" m0 k* f
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1. 刚打开文献，查了下杂志的IF，并以为是一篇用4因子（OSNL）诱导鸡体细胞重编程的文章，但看过摘要后发现自己错了，这是一篇”利用重组蛋白探索鸡ESCs 培养体系“的文章，文章具有较好的创新性，给了我一些启发，如在 用蛋白介导体细胞重编程后，是否可以利用重组蛋白 一直维持干细胞的多能性，甚至创建一种新物种ESCs的培养体系，值得尝试。) x! A6 t: D: @/ |5 x. l

% l" z+ ^4 c; X3 e2. 文章的思路: A. 用EGFP验证9R的功能； B. 国建pCMV-PF-9R-IRES-EGFP载体，瞬时转染293FT细胞，提取蛋白并浓缩； C. 加到鸡ESCs培养体系中，观察传代次数（一系列的检测指标），发现重组蛋白能抑制鸡ESCs的分化，能在体外维持ESCs的多能性: f/ z' \+ j* v
, k. f8 b: ?. F1 l0 b) Z+ V8 K: p( p
3. 有一些疑问:  目前哪些物种获得了可以再体外长期传代的ESCs，求高手指教！！！另外文章中超声破碎细胞时的溶液是什么，还有转染效率怎么样（出现绿色的时间和比例，质粒应该没有线性化吧）这点自己比较感兴趣，希望Xray19能告知
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5 O1 d* ?- b: v7 E  g% s/ ?4. 文章整体比较简单，不过也是一个完整的Story，自己推测应该是一名研究生做的工作。顶一个
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xray19

回复 Andyhigh 的帖子9 j% h5 ?/ o0 f1 G. x% b

: Q1 |3 h# C/ Z3 D楼主好厉害。我不是作者，把文章down下来一直在偷懒没有看，还搞错了文章内容，真的好惭愧。。。。
/ }2 a7 x9 o0 x& t, t7 K# ~先不说话，赶紧看文章0 _* x! j4 C8 c$ t! D

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xray19

Andyhigh 发表于 2014-4-6 15:17
" t% G5 P) k7 _: z+ W3 V您是本文作者嘛，很希望您能对本篇文章进行总结和评价！
  T. E0 H) B7 k8 J4 s: Q' l我刚大致看了下，这里与大家分享下我的看法，希 ...

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实在汗呐，下了文章后匆匆瞄了一眼摘要，跟Andyhigh一样，一开始也以为是用四因子蛋白诱导鸡细胞重编程的。大家都在热火火的用转导肽介导四因子造ipsc，这篇文章的作者反其道而行之，由此想到利用转导肽融合的干性因子去阻止鸡ESC在传代过程中多能性丢失，这是做ESC培养基研发的节奏啊。Andyhigh兄已经对文章评价的非常到位了，不多说了。
3 _  Y. i- P+ O8 p8 E+ W文中中超声破碎细胞的溶液应该是PBS吧（cells were washed twice with PBS and then ultrasonically disrupted），若有其它特殊的缓冲液应该会在方法中说明的。
3 w& T. q% B8 H7 v# F2 V293FT的转染效率，文章中也没说，但我利用lip2000转染过293FT（文章用的磷酸钙沉淀），效率超高，90%以上了，24小时的GFP几乎就全亮了，48小时达顶峰。: c% X/ v2 Z1 O8 ]) l% K# @
质粒线性化主要是为了稳定细胞系筛选时便于DNA片段插入基因组，瞬时表达时对转染效率和表达量并无助力，所以文章中估计没有线性化。6 N% A" D: g5 ^
人和小鼠的ESC是有可长期传代的细胞系的，这个大家估计都知道，置于其它的俺是小白，就不清楚了。倒是可以查下大鼠，果蝇，猪和牛是否有ESC细胞系。

Andyhigh

回复 xray19 的帖子5 |- [2 Z, ^2 k9 u& m& W5 ~

' s. ~7 y( t$ D, X% Z大鼠的ESCs及培养体系有，猪ESCs也有，但是缺乏培养体系，其他的不太确定，估计绝大部分都没有公认的培养体系。

xray19

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5 H0 J% G- q0 Y权限不够，还加不了好友。有机会多就ips 聊聊