2014年 Nature scientific reports上的一篇关于“重组蛋白诱导iPSCs”的读后感

xray19

wanglimaomao 发表于 2014-4-1 17:02 / ]9 Z6 m8 L5 @7 C7 Q
我对蛋白重编程不是很了解。但是针对不能扩增传代有点想法。也不一定正确，欢迎批评指正。首先体外合成的蛋 ...

' ?) J/ x; A& U! S7 G# C; v; k/ X& U: a$ A
即便将4个基因整合到基因组中，当细胞向ipsc转化过程中，外源表达的基因会逐渐被沉默的，直至最后完全沉默。与此同时，细胞内源性的干性基因会逐渐获得表达。

xray19

感谢楼主，我也提供一篇protein transduction induced ipsc 的文章，供大家讨论

Andyhigh

xray19 发表于 2014-4-5 23:06
( \  t3 R& s. x1 Q7 E感谢楼主，我也提供一篇protein transduction induced ipsc 的文章，供大家讨论

: n2 K4 I8 R( T9 N最好上传下文章！！！

xray19

5 a  J0 o+ }, p2 x7 D8 r
不好意思，昨天没上传上去

Andyhigh

xray19 发表于 2014-4-6 11:56
# T( W3 L' Z1 S! `不好意思，昨天没上传上去

# Z( u6 D* B) D7 ]7 @4 H您是本文作者嘛，很希望您能对本篇文章进行总结和评价！0 p9 k1 `3 U" F! E) s
我刚大致看了下，这里与大家分享下我的看法，希望能起到抛砖引玉的作用。
, @9 R* e* O+ i  G
3 }* D6 I, P+ r6 A% E1. 刚打开文献，查了下杂志的IF，并以为是一篇用4因子（OSNL）诱导鸡体细胞重编程的文章，但看过摘要后发现自己错了，这是一篇”利用重组蛋白探索鸡ESCs 培养体系“的文章，文章具有较好的创新性，给了我一些启发，如在 用蛋白介导体细胞重编程后，是否可以利用重组蛋白 一直维持干细胞的多能性，甚至创建一种新物种ESCs的培养体系，值得尝试。- l5 o" k, j5 G; @

) I( J2 J! j3 ^" b, M2. 文章的思路: A. 用EGFP验证9R的功能； B. 国建pCMV-PF-9R-IRES-EGFP载体，瞬时转染293FT细胞，提取蛋白并浓缩； C. 加到鸡ESCs培养体系中，观察传代次数（一系列的检测指标），发现重组蛋白能抑制鸡ESCs的分化，能在体外维持ESCs的多能性/ U  {* ~" C, k6 ~1 c/ I% S1 Y6 s9 Q

" z( D( C: x! ?8 B( F2 g3. 有一些疑问:  目前哪些物种获得了可以再体外长期传代的ESCs，求高手指教！！！另外文章中超声破碎细胞时的溶液是什么，还有转染效率怎么样（出现绿色的时间和比例，质粒应该没有线性化吧）这点自己比较感兴趣，希望Xray19能告知# @4 `  M- R* n; [% J

6 o8 y( J1 O( g' Y3 z4. 文章整体比较简单，不过也是一个完整的Story，自己推测应该是一名研究生做的工作。顶一个
" j3 T# Q9 F' K% ^( P4 n. \  A' H

xray19

回复 Andyhigh 的帖子
1 F" D7 v+ L/ F  M* H8 H9 q7 _$ l
楼主好厉害。我不是作者，把文章down下来一直在偷懒没有看，还搞错了文章内容，真的好惭愧。。。。
- k! R% H8 S; {+ j- c( z+ B2 ^9 |先不说话，赶紧看文章
& T4 d- W0 P2 W; t! u
8 m8 W% x2 E+ o; Z8 f( j3 H

xray19

Andyhigh 发表于 2014-4-6 15:17
$ n8 [8 W( e: n% F: Q' {您是本文作者嘛，很希望您能对本篇文章进行总结和评价！+ K$ }) l+ o% [# Q# Q/ O
我刚大致看了下，这里与大家分享下我的看法，希 ...

( P+ V- @2 e4 g8 n实在汗呐，下了文章后匆匆瞄了一眼摘要，跟Andyhigh一样，一开始也以为是用四因子蛋白诱导鸡细胞重编程的。大家都在热火火的用转导肽介导四因子造ipsc，这篇文章的作者反其道而行之，由此想到利用转导肽融合的干性因子去阻止鸡ESC在传代过程中多能性丢失，这是做ESC培养基研发的节奏啊。Andyhigh兄已经对文章评价的非常到位了，不多说了。
) Z8 ^1 i9 x8 d8 z+ T" j+ w文中中超声破碎细胞的溶液应该是PBS吧（cells were washed twice with PBS and then ultrasonically disrupted），若有其它特殊的缓冲液应该会在方法中说明的。8 v: D3 V7 g8 x5 Q* I/ O, q
293FT的转染效率，文章中也没说，但我利用lip2000转染过293FT（文章用的磷酸钙沉淀），效率超高，90%以上了，24小时的GFP几乎就全亮了，48小时达顶峰。
% x+ i  j  w& G) W质粒线性化主要是为了稳定细胞系筛选时便于DNA片段插入基因组，瞬时表达时对转染效率和表达量并无助力，所以文章中估计没有线性化。6 ]9 e# T7 ]2 O- x
人和小鼠的ESC是有可长期传代的细胞系的，这个大家估计都知道，置于其它的俺是小白，就不清楚了。倒是可以查下大鼠，果蝇，猪和牛是否有ESC细胞系。

Andyhigh

回复 xray19 的帖子" O: u: G1 D! c" c3 u4 s" r4 b
$ O( a/ O  _- [6 L: w
大鼠的ESCs及培养体系有，猪ESCs也有，但是缺乏培养体系，其他的不太确定，估计绝大部分都没有公认的培养体系。

xray19

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" T4 ^' P* b/ M) `4 A# n' \( x
权限不够，还加不了好友。有机会多就ips 聊聊