2014年 Nature scientific reports上的一篇关于“重组蛋白诱导iPSCs”的读后感

xray19

wanglimaomao 发表于 2014-4-1 17:02
! N7 u2 q- h3 L9 R* m& k我对蛋白重编程不是很了解。但是针对不能扩增传代有点想法。也不一定正确，欢迎批评指正。首先体外合成的蛋 ...

3 {2 L" ]2 l! c/ Y* ^即便将4个基因整合到基因组中，当细胞向ipsc转化过程中，外源表达的基因会逐渐被沉默的，直至最后完全沉默。与此同时，细胞内源性的干性基因会逐渐获得表达。

xray19

感谢楼主，我也提供一篇protein transduction induced ipsc 的文章，供大家讨论

Andyhigh

xray19 发表于 2014-4-5 23:06
3 R8 k! I9 W& n3 h感谢楼主，我也提供一篇protein transduction induced ipsc 的文章，供大家讨论

6 S: K+ L& z6 c: O" y$ I5 @
最好上传下文章！！！

xray19

" z2 p& @' w: B( h2 _* Y
不好意思，昨天没上传上去

Andyhigh

xray19 发表于 2014-4-6 11:56 ! F0 g8 Q+ p' }  Z; B
不好意思，昨天没上传上去

3 w! l3 }& [; l9 ~( i1 \; U
您是本文作者嘛，很希望您能对本篇文章进行总结和评价！
" r% `0 t% r+ j我刚大致看了下，这里与大家分享下我的看法，希望能起到抛砖引玉的作用。4 B. _8 J% M  b- y1 }
2 y9 Z% @& c: ~2 O
1. 刚打开文献，查了下杂志的IF，并以为是一篇用4因子（OSNL）诱导鸡体细胞重编程的文章，但看过摘要后发现自己错了，这是一篇”利用重组蛋白探索鸡ESCs 培养体系“的文章，文章具有较好的创新性，给了我一些启发，如在 用蛋白介导体细胞重编程后，是否可以利用重组蛋白 一直维持干细胞的多能性，甚至创建一种新物种ESCs的培养体系，值得尝试。* i1 {) y+ w3 a8 E/ [2 [2 V5 C, z# }
6 s; C8 a. N8 k; N1 m; U" ~
2. 文章的思路: A. 用EGFP验证9R的功能； B. 国建pCMV-PF-9R-IRES-EGFP载体，瞬时转染293FT细胞，提取蛋白并浓缩； C. 加到鸡ESCs培养体系中，观察传代次数（一系列的检测指标），发现重组蛋白能抑制鸡ESCs的分化，能在体外维持ESCs的多能性
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" K9 ^5 I& H5 n% M, S0 U& l; N3. 有一些疑问:  目前哪些物种获得了可以再体外长期传代的ESCs，求高手指教！！！另外文章中超声破碎细胞时的溶液是什么，还有转染效率怎么样（出现绿色的时间和比例，质粒应该没有线性化吧）这点自己比较感兴趣，希望Xray19能告知
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4. 文章整体比较简单，不过也是一个完整的Story，自己推测应该是一名研究生做的工作。顶一个0 \1 g' r8 \8 j; \& \

xray19

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5 M7 B  N  r" ~! S) W
0 ?' Y' D& q; c# T楼主好厉害。我不是作者，把文章down下来一直在偷懒没有看，还搞错了文章内容，真的好惭愧。。。。; M' I9 B* d* X! c
先不说话，赶紧看文章3 [" Q* a/ ^  U/ `; p. B
/ W9 m3 l% p) X5 z% t+ v, O0 A

xray19

Andyhigh 发表于 2014-4-6 15:17
5 L1 L4 ]: k+ k( ]. m1 {4 v, W) K您是本文作者嘛，很希望您能对本篇文章进行总结和评价！* {' q1 K  M: s' O- p
我刚大致看了下，这里与大家分享下我的看法，希 ...

* x. B+ Z  K5 p" H' g
实在汗呐，下了文章后匆匆瞄了一眼摘要，跟Andyhigh一样，一开始也以为是用四因子蛋白诱导鸡细胞重编程的。大家都在热火火的用转导肽介导四因子造ipsc，这篇文章的作者反其道而行之，由此想到利用转导肽融合的干性因子去阻止鸡ESC在传代过程中多能性丢失，这是做ESC培养基研发的节奏啊。Andyhigh兄已经对文章评价的非常到位了，不多说了。
4 {( e  O1 M$ ^, E$ g" Y2 `" i文中中超声破碎细胞的溶液应该是PBS吧（cells were washed twice with PBS and then ultrasonically disrupted），若有其它特殊的缓冲液应该会在方法中说明的。
# t% B( _% ^5 W4 R1 q8 @* F293FT的转染效率，文章中也没说，但我利用lip2000转染过293FT（文章用的磷酸钙沉淀），效率超高，90%以上了，24小时的GFP几乎就全亮了，48小时达顶峰。
  l( F6 t0 @! Y质粒线性化主要是为了稳定细胞系筛选时便于DNA片段插入基因组，瞬时表达时对转染效率和表达量并无助力，所以文章中估计没有线性化。
% ]+ n4 R1 k. h# i9 C人和小鼠的ESC是有可长期传代的细胞系的，这个大家估计都知道，置于其它的俺是小白，就不清楚了。倒是可以查下大鼠，果蝇，猪和牛是否有ESC细胞系。

Andyhigh

回复 xray19 的帖子6 Q% _! K) g$ f1 e# k: {4 O

3 J" U& \! }$ c( f% n: |0 `大鼠的ESCs及培养体系有，猪ESCs也有，但是缺乏培养体系，其他的不太确定，估计绝大部分都没有公认的培养体系。

xray19

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* N* H7 |" u* u$ q1 g& Z  S* C: H. @* i% t. _4 r
权限不够，还加不了好友。有机会多就ips 聊聊