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金话筒优秀版主

楼主

发表于 2014-4-26 21:34 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

请教问题如下：成纤维细胞诱导iPS细胞时，提前将成纤维细胞接种于培养板，第二天按细胞数量与病毒滴度加入病毒颗粒，同时培养基换成KnockDMEM+20%血清替代物继续培养，这个侵染后的成纤维细胞什么时候接种到饲养层上？还是一直养，知道出现克隆后挑出接入饲养层上？或者是在加入病毒颗粒前将成纤维细胞收集悬浮加入病毒颗粒后一起接种到饲养层？请高手指点！

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沙发

发表于 2014-10-22 15:28 |只看该作者

我也想知道，怎么没人回复呀

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藤椅

发表于 2014-10-23 10:21 |只看该作者

我们的经验是你说的前两种方法均可，1）侵染后的成纤维细胞一般6d后接种到饲养层上，2）也可等出现克隆（可能得10多d）后挑出（可以胰酶消化一下）接入饲养层上；3）“加入病毒颗粒前将成纤维细胞收集悬浮加入病毒颗粒后一起接种到饲养层”应该是不太提倡。

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板凳

发表于 2014-12-16 14:41 |只看该作者

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我们这边通常是在感染后5d时接种到滋养层上的，根据细胞状态可适当调整

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