原代悬浮细胞传代全死了

tiramisu

如题，之前长得还可以的原代悬浮培养一传代之后都没有了，大家的原代有没有这样的问题呢？我用的是离心法，是我的方法不对么？求教！

青云之上

你养的是什么细胞？
$ U1 s, S, p+ v" ^# X& A5 L第一、有可能是细胞和培养体系本身的问题，我之前弄乳腺肿瘤干细胞的时候就这样，原代很好，一传代克隆球就很少；
1 a; N6 i4 p: ^& a第二、你离心的时候用多大转速？离完在离心管底部肯定是能看到沉淀的如果本身有细胞的话，你可以注意下；5 F* }. F/ O+ y# c
第三、如果细胞不是很多，且不易增殖，可以考虑不离心，直接一传二或者更多，然后补足培养基。

tiramisu

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; j  v3 Y# v. r( i: k4 b5 T' R% H5 D. m; ~' _! p/ A. `& ]; t6 b6 f
我养的大肠癌原代，离心转速1000r，4min。离完感觉完全看不到沉淀。之前你也做得悬浮培养么？请教你怎么解决这个问题的？

tiramisu

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. w5 t0 v, Y% R
8 K; g  V( ^) o还想请教一下，你的培养基用的高糖还是低糖呢？

青云之上

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: G: e# m) n; k4 P% _, P6 w5 D4 k% z( i1 D8 ~7 |, N' E1 T. H6 ]# w$ S
不应该啊，方法没有问题啊，你确认下看离心机有没有问题，你可以试试提高转速~~~

青云之上

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2 |& H* \1 O" E8 h0 U% c
, L  v- H7 p  d4 w2 |高糖~~~

一滴清露lv

你好，看了你的帖子，你养的是原代悬浮干细胞球吗？想问问你一些问题：1，你的悬浮细胞中培养皿里面是否会存在很多杂质（如血细胞，凋亡的细胞碎片）的问题？该如何去掉或者避免产生这些杂质呢？2.悬浮细胞球长得好吗？我的原代培养的球数量微少，而且出现越长越少的问题？你知道这是什么原因吗？
# ]/ L6 o( v$ R& J$ o7 ^本人也是做的原代干细胞悬浮培养，因为处于摸索阶段，总是挫折满满，就想向你打听一下，希望能得到你的回复，谢谢！

细胞海洋

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' _$ [/ F# N; Z, c3 F# v$ u1 [建议你发新帖提问

tiramisu

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* Y, P; M5 Z8 j6 {6 ~# R! w' a0 q2 H2 a, B( h# j* E) l' b
我的情况跟你差不多，也是出于摸索阶段。杂质很多，有两种办法，第一就是不去管它，随着时间增长会自然死亡，或者在消化完组织后用低速离心的方法把其中较大的杂质去除，留上清再告诉离心得到细胞。我现在也很苦恼原代细胞数量的问题，跟老师讨论过之后还是觉得是消化的条件不对，决定多试几个条件。一起努力吧，希望日后可以多交流下经验。

一滴清露lv

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9 A! S& x9 j* d$ G0 L7 D; f; Q  {* z3 c! b) g- w+ k+ e0 D
谢谢！好啊，多多互相交流，也许就能发现一些存在问题或解决方法！