如何确定嘌呤霉素的药杀浓度？

Yorkshining

   如题，载体带嘌呤霉素抗性，想用合适的嘌呤霉素筛选细胞，这个具体该如何确定啊，望有经验的战友指点。。。

懵懂干细胞

呵呵 这个浓度还是摸索下的，不过在各种基因敲除文献里面都有参考浓度的，不一定适用你就是了，仅供参考。
6 j0 v; ~, z" R- z1 A0 N细胞数量不一样，浓度也会变化的！ 祝你顺利

Yorkshining

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  C, b2 y; J( G: T0 k& J/ }8 z3 O% f7 O2 `  n0 J7 f) R, j
谢谢回复 我的意思是指具体如何摸索，主要指以几天内杀死所有细胞的最小浓度为标准，看到好多的都说法不一，有的说5-7天，有的说10-14天。。。

cytobiology

建议2-10ug/ml 的浓度梯度进行尝试摸索！5 c2 X0 n- K: Y0 p+ }! j) {

懵懂干细胞

回复 Yorkshining 的帖子3 i. n2 `+ a" N4 [- g, `/ H
: I5 m& y: I+ h& c# e" @
这是我当初的资料，在进行药物筛选过程中根据细胞数量可以在 0.5-1.0μg/ml  之间适当提高嘌呤霉素的工作浓度。. ~- D0 W/ W9 L
为了达到更好的药物筛选效果我们在筛选过程中使用过 0.8μg/ml 和 1.0μg/ml 两个浓度的嘌呤霉素进行筛选。+ m% s7 C2 d9 Q" w
电穿孔转染后，会有少量的 ES 细胞死亡。电转两天后就可以进行荧光表达情况观察，但这个时候荧光表达率大约在  10%-30%，经过一轮嘌呤霉素药物筛选后可以将荧光表达率提高到  50%-60%之间，三轮药物筛选后荧光表达率高达 90%以上。每次药物培养48h之后用新鲜培养基再培养48小时复苏下细胞对细胞的活力有好处。

Yorkshining

回复 cytobiology 的帖子+ H  a4 U) [' F

2 l9 M. b" ?3 G: S7 X6 ~/ i感谢回复，那么以几天内杀死所有细胞的最小浓度为后期试验用的浓度呢？

cytobiology

回复 Yorkshining 的帖子- o( F: F( I7 {1 Z) U6 T' i- \

( E5 m; z& Y. H2 j4 R三天左右。时间太短说明对细胞的毒性太大了，时间太长又会浪费太多自己的时间！