干细胞与接触抑制现象的关系？

buildcountry

关于接触抑制+ p4 S7 N' H) u- n, @
接触抑制(contact inhibition)是指细胞在生长过程中达到相互接触时停止分裂的现象，1954年，由艾伯克龙比(Aberchrombie)等首先发现。由于培养基中的生长因子耗尽时也会产生生长抑制，所以将正常细胞因相互接触而抑制分裂的现象改称为密度依赖性的生长抑制(density-dependent inhibition of growth)。在相同条件下培养的恶性细胞(malignant cells)对密度依赖性生长抑制失去敏感性，因而不会在形成单层时停止生长，而是相互堆积形成多层生长的聚集体，这种现象也说明恶性细胞的生长和分裂已经失去了控制，调节细胞正常生长和分裂的信号对于恶性细胞不再起作用。   
7 N, a' _$ D" W/ t% U+ }形成原因 , x2 E( Z* S  R+ \% l/ w
  细胞膜上有糖类和蛋白质共同构成的糖蛋白，也叫做糖被，它在细胞上起识别作用。当细胞增殖到一定程度，也就是互相挨在一起的时候，糖蛋白识别了这种信息，就会使细胞停止继续繁殖。   8 k6 `7 W& G. S9 V: p" k- e
详细解释 0 Y/ i% ^# i. I3 z; R+ Q8 p
  狭义的运动接触抑制指细胞运动由于与其他细胞接触而受到限制。例如，正常的成纤维细胞，其细胞运动由于与其他细胞接触而受到限制，因此呈现具有一定方向性的排列，而转化的成纤维细胞，由于失去了这一限制，因此呈现多方向性的互相堆积成十字排列(criss cross)。  0 x; }" s, \, _7 X! \# y
广义的增殖接触抑制也称细胞过密性抑制(density dependent inhibition)。对于正常细胞，当进行单层培养时，在一定面积内细胞的密度增加，则增殖受到抑制。而对于转化细胞，细胞间的接触增加则发生堆积(pile up)，此时在单层的细胞片上，可观察到多层的细胞团(focus)形成的岛状体。
5 n) k/ u9 M) p6 T以上，有几个疑问：
! Y4 W% u2 K/ m( Q0 K* I4 w( Y1.干细胞，如胚胎干细胞、ips细胞、羊膜间充质干细胞等有没有接触抑制现象？？" _7 a$ l, A5 q8 a, B
2.网上好像说胚胎干细胞无接触抑制现象是真的吗？流式检测羊膜间充质干细胞的胚胎干细胞marker SSEA-4高表达，同时失去接触抑制能力，有因果关系吗？/ }% o% E7 F- p
3..如果一种干细胞有接触抑制现象，会不会随着传代次数的增多而失去接触抑制能力？$ T7 U- U$ u3 U2 ]2 d/ z' k& z
4.失去接触抑制能力可能是因为消化的次数过多或时间过长导致糖蛋白受损的缘故吗？抑或是培养基中的某些成分作用的缘故？还是有其他原因？
. m( x0 \5 @6 M8 b. F5.接触抑制能力如何通过量化检测判断？比如说流式分析某个marker？, \9 t* }& W. ?
6.上述提到恶性细胞和转化细胞没有接触抑制现象，是否可以认为只要没有接触抑制能力的细胞即是恶性细胞或转化细胞？1 }, c+ t/ S8 ]% O7 y2 ~
7.是否可以认为失去接触抑制的能力的间充质干细胞已经不再是间充质干细胞了？" B0 @" T4 y' {: \
谢谢各位！

aochongyu

以前养的间充质干细胞有接触抑制现象，当细胞生长到铺满整瓶表面以后，瓶子的边缘就不再生长而形成细胞回缩，细胞开始老化。其他问题同样需要大神解答？？？

顺其自然

干细胞，特别是胚胎干细胞，它们应该是没有接触抑制的，很简单的一个例子：如果胚胎干细胞中存在接触抑制的话，那么由受精卵发育成培养的过程中以及我们的干细胞诱导分化发育的过程中，怎么可能形成细胞团块和组织呢？要知道这些细胞团块和组织都是N多层细胞构成的。所以，我认为，干细胞，特别是胚干细胞，是不存在接触抑制的。

buildcountry

回复 aochongyu 的帖子% q4 {, v' j% t" w/ |& b6 ^6 q

8 f" a* f& R! j+ [5 `+ s% ^" ~/ N我跟你的情况很像啊，长满后皿的边缘形成细胞会卷，有部分形成凸起，有的时候会整个皿的细胞长成一个肉球……

buildcountry

大牛都去哪儿了？呜呜呜呜呜呜

shaozi402

回复 顺其自然 的帖子
( o! m* S# E1 E* e' h* @) [" j6 N* i- `# w9 a
胚胎干细胞的爬片也显示：胚胎干细胞并不是单层的

zhangbin

我觉得接触抑制会不会产生并不能单纯的以细胞密度和细胞是不是单层来判断，在胚胎的发育过程中有的部位就算有接触也不一定存在生长抑制，我觉得这与细胞密度和其他分子机制共同调控。

孤野知—少帅

既然你指出的接触抑制(contact inhibition)的概念是指细胞在生长过程中达到相互接触时停止分裂的现象，那么判断是否接触抑制是不是应该从分裂相关的marker上进行检查，而干细胞也并非接触后就不再分裂

zb_ming

回复 buildcountry 的帖子- T% d$ F# E- O- A" n

5 V9 b5 Z# s6 }5 b- x6 `你们这种情况是：细胞没地儿去了，不卷才怪呢，下次你换个大的培养皿，看看，它会无限期长下去，知道再次没地儿去。

水念人倦

针对楼主的问题，有以下几个是我个人确定的：
8 j  [6 N6 z# I7 T/ F1.胚胎来源的干细胞可以说接触抑制现象几乎没有，可以长出叠层，而且传代若干代内仍可保持这一特性；另外楼主说的羊膜MSC是否为华通胶里的MSC，如果是的话，根据个人经验会有一定程度的接触抑制，但是也多少会长出一些叠层来，个人感觉12000-15000/T就是极限了，而且感觉传代之后细胞涨势不是很好。6 _! J  E7 k8 c! o/ a
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3.一般非恶性细胞或转化细胞的话，根据个人经验随着传代往往是由没有接触抑制能力变为有接触抑制能力。1 j6 t1 L- U6 F8 [  A/ d/ b( @

) X8 y+ e. W* ^/ N6.个人认为不可以，像第一个问题里提到的胚胎来源的干细胞就不是两者之一。' V) f6 }7 ]6 r5 j: v
* }2 J& t4 D/ C/ g4 `7 ^2 }
7.同上，不可以，embryonic BM MSC就是很好的例子。
/ j% e$ S9 T# F7 s然后再来谈一下个人不太确定的内容，欢迎楼主和各路大神指点：; c% |( S/ h3 @7 Y2 ^7 V# U/ h* Q! v
2.对于SSEA-A和接触抑制的关系，个人没有什么了解，还望楼主推荐一些资料或者文献。' w2 t$ w8 t+ r" F* ?- o
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4.个人认为由于消化导致的可能性不大，目前对于细胞培养这一块已经相当成熟，培养基成分应该不成问题，而且目前用到的胰酶也越来越趋于温和，我也没见过表明帮助细胞贴壁的蛋白与胞间传递信息的蛋白在成分上有极大相似程度的文章，还望大家指点。（貌似CD33有胞间信号传递和抑制效应受体的作用，楼主可以了解一下相关内容）" I1 i! {- ]6 K1 c' c1 p" f

$ ]5 A8 {) E$ e: w4 F5.如果通过流式来做的话，我觉得可以用CD33来做，但是查了一下资料，好像针对CD33的研究比较多都是与急性白血病的靶向治疗相关的，所以是否可以还要楼主自己研究了；另外，接触抑制能力是否与干性基因的表达呈负相关呢？也许P一下OCT3/4，NANOG,SOX2可以一试。1 y" L$ G4 Y& p0 n4 \( E& ]7 f2 ]