求助，有做过羊膜上皮细胞的大神吗？求帮忙

听不到

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那是把肉眼可见的血丝之类的全部都洗掉吗？基本上我试了试，只能用镊子往下撕，但是一撕就撕掉了一层，我怕撕掉的是羊膜，本来细胞就少，还撕掉一些。还有就是，我怀疑我是不是不能48h换液啊？有点早？48h半量换液，72h再全量换液？

frankhu

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+ _5 v1 f# w# m1 b8 Y6 G) [  x& X
换液时间不是关键，羊膜上皮细胞几个小时就能贴壁。正常情况下，刚分离的羊膜上皮细胞中会夹杂大量的间充质细胞，但是图片中也没看到。最好做之前多查阅几篇文献，然后再做几次，反复总结。想一次就成功分离羊膜上皮细胞，对技术本身要求还是太高了。还有确定培养体系是没问题的。

听不到

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" C  u2 c) m( _7 L" N6 z) J/ w
培养体系的话，我看的很多人用的是DMEM/F12+10%FBS+10ng/ml EGF，不知道行不行，我现在用的是一个乳腺上皮细胞培养液，但是我查到说有个胎盘上皮细胞培养基，貌似更适合...完全不知道应该用啥

frankhu

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) ~* O/ f" _6 S' f3 W你就选一种认为比较靠谱的试一下

fuyinsheng

0.05%胰酶对羊膜的消化效果不好，及时长时间消化也没有太好的效率，及时消化下来了由于胰酶处理时间太长也导致贴壁率低，建议用0.25%的胰酶试试

听不到

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# _6 i, E9 y3 c+ c1 ]' a
5 l# u! D/ i5 M7 Q0 J2 V我查的大部分文献都是0.05%的胰酶...0.25%的话大概消化多长时间呢？主要是羊膜不好整，然后就不怎么敢试

听不到

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0 {) O- g: Z& ?& N7 [你做过这个么？用的是啥培养液啊？

frankhu

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9 P: Y, y# b4 x# }5 `1 f
4 O& Y: D& W9 q做过，DMEM+非必需氨基酸+EGF+10%胎牛血清

frankhu

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做过，DMEM+非必需氨基酸+EGF+10%胎牛血清

听不到

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1 k& c9 H: _2 Q2 q) N, J好的，谢谢哈~赶脚我接下来就是注重去净血，还有多消化几次就好了。我再试试啦~