手采集外周血培养CIK疑问！！！

lyj-0017

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5 Q3 g9 `% q9 ^9 K/ K
7 r4 L. b- z4 D5 H采集的外周血离心后，分离出血浆，剩下的不就只有细胞团了吗？再怎么按照1:1加PBS稀释？

lyj-0017

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- J3 J9 ?( D9 w. M0 y! I0 M* m, S9 L: v  \6 u' |
混合的时候，有没有可能加入的DC细胞太多，部分DC细胞因接收不到生长信号而凋亡？

lyj-0017

回复 levell 的帖子" U' O+ }8 Q1 F1 Q9 G
9 `% S; D& H( k, e# O- j. m+ d
首次铺瓶贴壁时，加入培养瓶中PBMC的密度一般控制在什么范围之内？分离出来的悬浮细胞再次装瓶的密度范围是多少？

aochongyu

以前比较过先离心外周血再加盐水稀释和直接加盐水稀释，感觉先分离血浆得到的单个核更多一些，并且省分离液

lyj-0017

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# N+ W$ n* ~0 m7 n; D9 n( f: `1 I" @  i; [
我个人也感觉先离心外周血再加盐水稀释会更好一些，无奈领导执意认为后者好~

levell

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- u7 D. }* u2 I7 @3 a' ]/ p0 T% ?' N! p" t+ M1 M# F
剩下的细胞也是有体积的啊，按体积加入PBS就好啦

levell

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& V  P5 i- n. X$ a8 C! h9 g) x9 F
首次贴壁时候将单核细胞调整为2×106/ml，2h贴壁后移出悬浮细胞，调整浓度为1-2×106/ml，以经验来说就直接移出密度就合适着呢，不用再处理，直接加因子就好

xyz2120091064

个人认为先离心富集红细胞再稀释，这样不仅红细胞多而且有自体血浆

lyj-0017

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& }6 a1 u4 ~! O! P0 s3 sOK，非常感谢！

lyj-0017

回复 xyz2120091064 的帖子! U5 j& v% G% D3 H6 L

, N5 ~; ?/ l" K+ [0 R自体血浆不是已经离心去除掉了吗？