手采集外周血培养CIK疑问！！！

Ivan0108

做自体的可以先离心，得到血清。然后加入生理盐水补足至原血液体积，然后和淋巴分离液1:1比例，2000转/分、20min 慢升慢降可以得到白膜层细胞，多洗几遍一般细胞还好，得率大概在70%左右。  留下来的血清可以后期加入细胞培养中。

lyj-0017

回复 Ivan0108 的帖子& O9 ~2 _/ u1 u* I5 D( _% j
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自体外周血离心的转速有什么要求？会不会有的患者外周血细胞不能完全离下来呢？再一个，抗凝剂过多会不会影响血细胞富集？

Ivan0108

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+ f) m: i$ B! e) Y- f+ b我们做这么多年了，28ml枸橼酸钠的采血袋没问题的。外周血2000rpm、10min离心就可以了。当然可以用肝素钠的10ml采血管也没问题，我们都试过。原理上肯定是肝素钠的好些，结合生产成本考虑，我们一直采用的采血袋。方便采集、运输，实验室也容易操作。

lyj-0017

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7 L5 G1 z! o: K% H
1 T7 D9 b7 x, A3 L: d6 l0 l; w你们用的应该是山东威高200ml的单联采血袋吧？采集外周血量100ml？

cjsbaicai

1. 一般来说，培养细胞必须采用血浆，而作为人体治疗，不建议用异体血浆，所以一般是离心后，取血浆作为日常培养基添加物。% w; Y; K' c. |: h2 C
2.关于因子添加，有很多文献报道，但你添加的因子不全，经典方法中少了IL-1α。
" B2 `& ^' A1 k9 O/ [3.DC不能扩增，且因操作技术问题，及患者本身问题而导致量不确定；CIK扩增比例大，在临床上很难与DC按一定比例培养，所以常用的方法是，全部混合，一起培养
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lyj-0017

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第一个问题，我是想知道实验室拿到采集的外周血后，是先将外周血加入离心管直接离心富集外周血里全部的血细胞，富集的血细胞再过淋巴细胞分离液？还是先将外周血用生理盐水稀释，然后再过淋巴细胞分离液？两种方式哪种方式分离得到的单个核细胞会更多？

cjsbaicai

如果之后的离心转速时间等参数相同的话，第一种会多些