如何提高慢病毒感染NK-92和T细胞效率

txy_love

如题，请各位有经验朋友提高宝贵建议，目前实验转染效率太低，在荧光显微镜下基本看不到荧光，求助ing。

zzyhelixinxin

细胞感染效率主要有以下几点需要注意：
/ @. {% }) [; k' q1.MOI值可以试着模式一下，一般慢病毒系统的MOI值在45-80不等；9 g$ P$ Y7 v4 g; T9 U
2.细胞的状态也会影响感染效率，所以在感染慢病毒时尽量在细胞状态非常好的情况下进行；
  r3 D6 Q, @2 H8 u3.感染的时候加促感染试剂；
  `# W/ z, M9 d, P" V, f! h1 {4.病毒的滴度和纯度要高

txy_love

问题是实验室没有超速离心机，现在只能采用millpore的纯化柱，滴度测定也只有~10（7）IU/ml。除了polybrene、鱼精蛋白、旋转离心法，不知道还有其他的好方法，这几种方法试了，感觉细胞会死，吹打后无法形成克隆。

细胞海洋

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看3楼

细胞海洋

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% a0 J) m' t* ?& g' M否则他会看不到! o2 j& {4 Q0 ~: E

txy_love

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问题是实验室没有超速离心机，现在只能采用millpore的纯化柱，滴度测定也只有~10（7）IU/ml。除了polybrene、鱼精蛋白、旋转离心法，不知道还有其他的好方法，这几种方法试了，感觉细胞会死，吹打后无法形成克隆。

zzyhelixinxin

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+ p3 W" h# `6 A5 P" M, x4 V; L* o& q3 q* Y/ @) s
体外实验10（7）IU/ml的病毒滴度偏低，若你的细胞是比较难感染的细胞，这个滴度基本没有多大用处，病毒滴度在10的8次方效果会好很多。

txy_love

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$ c. C8 m7 P2 \8 R# F4 P* |/ ^
细胞的确比较难转，不知道你可用过millpore的纯化柱浓缩病毒上清？与超速离心相比，浓缩的病毒滴度大概要低几个数量级？

zzyhelixinxin

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: o+ s: H1 O0 ~3 D, S# _. _  Xmillpore的纯化柱浓缩病毒效果不如超速离心，前者会损失很多病毒，一致导致病毒滴度偏低。建议找其他实验室借用超速离心机进行浓缩，或许你会发现效果好很多。

yuanyecat

你要用用life tech的病毒包装试剂盒吧，那个效率还是不错的。