无血清培养富集肿瘤干细胞的若干问题

hottodeath

我最近刚开始接触富集肿瘤干细胞，用的是MCF-7，看了大家说的，决定用DMEM/F12，加10ng/mL bFGF ， 20ng/mL EGF，  2%B27，  5μg/mL胰岛素，用低粘附的培养皿，是不是可以了？
8 b' X2 r9 E) n之前我没加胰岛素，B27也用错了，不是Minus Vitamin A的，还有操作手法等多种原因，没养出来。胰岛素还不知道要买哪种......7 P  `* r# X3 X6 p/ D
好多都不清楚啊，周围也没有在做这个的前辈，只能在这里求大家的指教！！！

hottodeath

有看到用胰岛素转铁蛋白亚硒酸钠添加剂（insulin-transferrin-sodiumselenitesupplement，ITS），也有Insulin, Human Recombinant, Zinc Solution的，是不是都可以啊

eanhappy

你们都不加双抗吗

木三阿凉

其他的生长因子都好理解，我想问一下各路大神，这个实验为什么要加胰岛素？

细胞海洋

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5 B8 c8 i' b) [! w5 Q: W4 W9 F) n" m& N
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木三阿凉

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* I8 I3 |" Y" q$ G/ H; k
' x  \7 n- F* p" u3 [我也有相同疑惑，不知道这个问题你现在解决了没有？

hottodeath

回复 木三阿凉 的帖子# R( m0 f/ _& M( k0 O- Y  L! N

6 m1 r9 v2 ?6 x& [( j* f" F/ _5 N我也是在论坛里看到的，MCF7需要insulin，有促进蛋白质合成，促进增殖的作用。现在还在养，无血清培养基培养了5天了，没看到几个活细胞（我种的密度很低）。

木三阿凉

回复 hottodeath 的帖子$ C+ S2 j; [& s6 r! O
5 V, i) K  o1 N0 [- ?
哦，MCF-7必须要添加insulin吗

木三阿凉

回复 hottodeath 的帖子4 c# J, u+ S2 B" o% o" ~+ q

$ |% J7 g5 c- d5 c9 ^8 x3 S哦，MCF-7必须要添加insulin吗

hottodeath

回复 木三阿凉 的帖子* q9 f- Y% Z" e6 m/ f/ q* U1 G0 U1 j
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这个我也不清楚。按以上培养的6天了，MCF-7里面球没看到，活细胞也没见几个了，好悲伤。