无血清培养富集肿瘤干细胞的若干问题

hottodeath

我最近刚开始接触富集肿瘤干细胞，用的是MCF-7，看了大家说的，决定用DMEM/F12，加10ng/mL bFGF ， 20ng/mL EGF，  2%B27，  5μg/mL胰岛素，用低粘附的培养皿，是不是可以了？
' q, u; R! j2 k6 G6 O, }% A- p+ }之前我没加胰岛素，B27也用错了，不是Minus Vitamin A的，还有操作手法等多种原因，没养出来。胰岛素还不知道要买哪种......
1 j' t3 ], Q, f好多都不清楚啊，周围也没有在做这个的前辈，只能在这里求大家的指教！！！

hottodeath

有看到用胰岛素转铁蛋白亚硒酸钠添加剂（insulin-transferrin-sodiumselenitesupplement，ITS），也有Insulin, Human Recombinant, Zinc Solution的，是不是都可以啊

eanhappy

你们都不加双抗吗

木三阿凉

其他的生长因子都好理解，我想问一下各路大神，这个实验为什么要加胰岛素？

细胞海洋

回复 木三阿凉 的帖子4 A' i* R+ \) t
( u" y+ X$ @. H7 u) L- o" e4 P6 E1 \
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木三阿凉

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# m0 {0 @5 q0 s9 |( e6 T
$ A9 I& Y; l* X+ C) q) A  `$ t1 H我也有相同疑惑，不知道这个问题你现在解决了没有？

hottodeath

回复 木三阿凉 的帖子/ m( n: }3 h7 |" {% ]2 r

( F* U( y. ^" {/ C) c- Q我也是在论坛里看到的，MCF7需要insulin，有促进蛋白质合成，促进增殖的作用。现在还在养，无血清培养基培养了5天了，没看到几个活细胞（我种的密度很低）。

木三阿凉

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- W; E& Y0 @  D) Y7 ?
哦，MCF-7必须要添加insulin吗

木三阿凉

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1 e6 s" Y$ Q: N5 j
4 L6 `! @! _& b" b# _哦，MCF-7必须要添加insulin吗

hottodeath

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8 d$ R7 j+ y; R& Z" n9 m" @这个我也不清楚。按以上培养的6天了，MCF-7里面球没看到，活细胞也没见几个了，好悲伤。