请教有关DC-CIK培养，悬浮细胞和贴壁细胞的问题

baby00000003

经过ficoll分离后，使用无血清培养，2.5h后移出悬浮细胞
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悬浮细胞使用IFN-gamma继续培养
6 P8 L' ~) G2 w8 m贴壁细胞加GM-CSF和IL-4: n4 F+ @# W5 L
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经过大约24小时后观察发现，移出的悬浮细胞又有一部分贴壁了，而贴壁细胞的瓶子里也有部分细胞是悬浮的
6 F# Z! {+ p& N8 \# }! y! f0 u3 f8 j8 v! U" M
请问这种现象正常么？
; i9 g/ k- ?& |  X  V% U' d如非正常，可有解决方案或者是实验中可能被忽视的关键步骤呢？7 F) j* ~& ^/ K5 [
如果细胞中混有部分红细胞是否会对培养产生不好的影响？" q0 a, \- C0 G- `( ?
: c/ X, k" w+ R& P
小可初探免疫细胞培养工艺，恳请各位老师不吝赐教，谢~

奇幻雪蓝

楼主你好！2 }7 l1 E% D; a
以上现象都正常。
, x2 j; V# n7 n1.移出的悬浮细胞又贴壁，是不是加了培养基只含有IFN-gamma？另外移出的细胞是不是在培养瓶内培养？密度大概多少？) Z$ @, @% ^. T- ]1 R. H
2.贴壁细胞的瓶子里也有部分细胞是悬浮的，这个密度多少？建议适当延长贴壁时间。! [8 m2 a1 E/ x% b' J; o
3.分离细胞前，是单采还是外周血采集？

cjsbaicai

在免疫细胞培养中，这种现象比较常见。主要与供者的身体状况和分离的细胞数量有关，有些供者血液中的单核细胞，巨噬细胞，DC细胞等贴壁细胞较多，如果按正常的静置分离时间的话，会导致部分的悬浮细胞贴壁，或部分的贴壁细胞贴壁不完全

luckyliu

首先，上清中有贴壁细胞（贴壁时间太短），和贴壁细胞里有悬浮细胞（收上清时洗涤不够，或者本来就成熟的DC是半贴壁的）都是正常的，
6 q/ |  r. U8 V$ n8 q8 C$ N' V) C其次，细胞中有红细胞对于培养影响不大

baby00000003

回复 奇幻雪蓝 的帖子# `6 h3 I5 r& n& v6 e% f3 j
) k! F8 k! x" g' M' P; t
第一次做，准备的不充分，当时先培养了2.5h就直接分瓶加因子了，过夜以后观察，就有如上的现象, V, S: V) y0 l2 T1 Q1 P" m
做了一份外周血、一份脐带血，体积都在120ml左右，单核细胞总数都是3*10^8
$ C$ ], z' o# w! v, `3 J单核细胞密度3*10^6/ml,后经换液和传瓶调整到1.5*10^6/ml