【跪求流式大神】分选的流式图总是shift

dollar007

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/ |$ h+ v7 k& S
' |0 F9 h2 O+ s  q3 x4 h; y0 O举例说明：
! x# K1 h$ H, R4 S, R调研下华人的身高、体重。调研员仅仅选取了欧美的华人取样分析，显然这样的调研数据会shift，欧美的华人是喝牛奶的，比我们这些吃米饭长大的身高、体重要大。3 d, O/ L2 T" l; q- g$ N
我是怀疑你阈值没设定对，你的目标细胞有大有小，你的仪器设定天然的将一部份小细胞屏蔽了，实验结果仅仅显示了大细胞的特征，所以shift。
5 G. `) c' Y4 R; e+ F" g. c; b. m( q5 x个人推测。以前我也碰到过类似问题。空白本底其高无比，峰移出了阴性置信区间。

yuanyecat

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! f# k' @% N7 t0 g, y1 _0 U: e
( M' z- H! b1 c3 ]: x  y你有没有做iso抗体看看非特异性结合,我觉得你这种情况是非特异性结合造成的，不用太在意和担心。

zz091115

刚才没仔细看你的实验 你是两步法 一定要用IgG做对照 另外 没人有Ho33342区分死细胞 Ho33342是做SP用的 活死细胞都能染上的 你需要用DAPI或是7AAD 调阈值对于信号不会有任何影响 只是机器把输出信号小于阈值的部分不显示不记录而已 问题在于原代细胞不是一个纯的细胞群体 所以斜角问题和粘连很严重 你可以用FSC-A FSC-H 来区分单细胞和粘连群体 你去看看文章 做上皮细胞的 比如肿瘤 都是斜向的 所以没关系 不用担心 做好对照就OK了

zz091115

刚才没仔细看你的实验 你是两步法 一定要用IgG做对照 另外 没人有Ho33342区分死细胞 Ho33342是做SP用的 活死细胞都能染上的 你需要用DAPI或是7AAD 调阈值对于信号不会有任何影响 只是机器把输出信号小于阈值的部分不显示不记录而已 问题在于原代细胞不是一个纯的细胞群体 所以斜角问题和粘连很严重 你可以用FSC-A FSC-H 来区分单细胞和粘连群体 你去看看文章 做上皮细胞的 比如肿瘤 都是斜向的 所以没关系 不用担心 做好对照就OK了

zz091115

另外提醒你Biotin的流式抗体只要4度15分钟就够了 你的非特异信号太多了 另外一个抗体你最好查查是不是可以做流式 如果可以 15分钟足矣

zz091115

你的流式根本没有能激发Ho33342的激光器 你用这东西搞笑了啊 DAPI你也不能用 你可以考虑用7AAD （PerCP5.5通道 488激光器激发）或是Draq7 （APC-CY7通道 633激光器激发）来区分死细胞 先去问问有没有那个通道 不要乱用东西

zz091115

还是没看仔细 来回翻页好麻烦 你可以用DAPI 358激光器 可以 Ho33342和几乎所有通道有点补偿 所以很不好 : d+ e9 ]9 y$ a& W