用什么牌子的淋巴分离液分离脐血单个核细胞？

小梓莜

回复 mania7041 的帖子8 B3 c3 G% Q$ ~* P- S
; O0 k! b1 X8 {% z2 ^) ?4 j
想问下你那边脐带血一般放置多久进行分离？分离的效果如何，单个核细胞数目多少？谢谢参与讨论~

hk456

我们用的是天津浩洋的 效果不错  

小梓莜

回复 hk456 的帖子
: H2 f$ I* r+ D  w# t4 R0 R: B* x% k% x5 j/ b
谢谢回复~~

lt595370417

回复 小梓莜 的帖子( ~6 E& z$ T5 U# q# X
# c5 F. ]; K  F5 C3 _- z' k& ^
我们都是用20ml的分离液加上25ml稀释过的血液分离，你这个是不是比例有点问题......而且脐血时间放的确实有点长

chenlin080102

分不出来的原因很简单，并不是分离液不好的原因，而是脐血跟外周血存在本质的区别，我之前也是做不出来，现在优化工艺后已经解决这个问题了，因为脐血里面含有大量未成熟红细胞，这部分红细胞密度很小，所以正常方法是离心离不下去的

Ivan0108

回复 小梓莜 的帖子
) b. `8 X, r) U  f6 m0 H4 |. @" K& o( T- L. Y* q2 F
1、存放时间久的血液，分离效果比较差。而且后期细胞培养难度也比较大，主要是增殖少。1 |! e7 s7 ~8 _7 T. M& A" {2 a
2、一般都使用天津灏洋的就可以了，实验级就可以，不会检测内毒素超标的情况。# H" x1 P* T( O% F( D
3、分离效果也与血液有关，有些人血液血脂比较高，分离时效果也会不好，而且会掺杂许多红细胞。
5 n3 W" c/ h' l0 X9 O1 B' u4、如果要得到比较纯的PBMC，可以参考先采用羟乙基淀粉沉降红细胞再上淋巴分离液，这样效果很好。就是得率可能稍微低一点。

chenguangyu

天津TBD

小梓莜

回复 chenlin080102 的帖子
+ x7 D% Y. ]& u% {+ R8 C6 D
0 }# P4 d3 h( F( m您好！我目前离心效果好了点，留在白膜层中的红细胞减少了很多，剩下部分会再用红细胞裂解液裂解，不知您那边是如何优化的呢？改变离心转速？还是延长离心时间？谢谢您的指教。

chenlin080102

回复 小梓莜 的帖子
# ?) E4 g4 S( q+ P2 x& _8 Q5 S2 a6 n( `+ @* g
其实要从根本找原因，最重要的原因不是分离液，而是脐血本身的特性，你可以上网查查脐血与正常外周血的区别，然后网上能找到很多关于一些分离脐血的经典方法

chenlin080102

回复 小梓莜 的帖子
2 c, w. ^/ }$ ]8 b
5 C# B3 o# l4 U! }9 c3 [  L还有就是脐血红细胞对红细胞裂解液不敏感，基本上没什么反应，我这边尝试的是这个结果，因为脐血的红细胞与外周血红细胞特性不一样