用什么牌子的淋巴分离液分离脐血单个核细胞？

小梓莜

大家好！最近在分离脐带血中的单个核细胞，方法为：淋巴分离液：脐带血=1:2，2000rpm，30min.离心后发现有很多红细胞存在在白膜层，不知该如何解决，是分离液的关系？还是要提高离心力？再或者是延长离心时间？希望各位大侠帮忙指导，谢谢

奇幻雪蓝

天津浩洋

2842368346

这跟很多因素有关，分离液，离心参数，离心升降速，血液本身，血液加到分离液方法等有关

youyang

细胞分离液有很大关系，进口的分离效果会更好

mania7041

目前给我做脐血单核细胞分离使用的是GE的淋巴分离液，效果还是不错的，你可以尝试一下，分离后红细胞基本都在底层，会有极少部分在淋巴分离液中的

hsu86

单个核细胞梯度离心提取白膜层有红细胞原因除了跟淋巴细胞分离液有关，还与离心机，离心力，离心时间，血液存放时间等因素相关
" U1 n5 r! O1 @9 F: ?; h$ g1. 大部分实验室一般用天津灏洋的淋巴细胞分离液，有两种一种是临床级，一种是实验级，临床级的包装好些和内毒素低一些，价格贵100块/瓶，分离效果差别不大" n" X2 N  a, I9 [
2.离心机要用水平离心机，品牌我现在用的是美国热电的，这机子质量好，很好用0 a' T  i) G4 N" C0 Q7 O
3. 离心参数，好点的离心机比如热电、久保田的可以800g ，15min 升降速调至最慢 热电的升6降4都没问题 国产的不好说，参数层次不齐一般就是加大离心力延长离心时间' v6 ~7 `* j# g$ b& k
4.血液不要放置太久 ，采集后2h内要处理，建议离去血浆再用生理盐水或DPBS重悬血细胞，重悬比例1:1.
9 }  K8 _/ n% J6 u$ |  P5.用50ml离心管，15ml的淋巴细胞分离液，加25ml血液，一般就可以比较清楚的分离到白膜层了

小梓莜

回复 mania7041 的帖子5 x7 l" G0 d& r) D. c" B5 _5 S
# x8 U9 {, O. D
您好！谢谢你的建议，我也听说GE淋巴分离液效果好，以后试试，想问下您那边做脐血单个核细胞分离，脐血一般存放多长时间，15h吗，或是更短？谢谢指教！

小梓莜

回复 hsu86 的帖子
1 ~8 f) }8 P1 l# `2 q6 @8 [$ |, q) d; P5 C
您好！谢谢这么详细的讲解，我讲讲我们这边的情况：
0 v2 d9 R4 b+ u& F- H1、离心机是热电牌子的，升9降3，曾经试过升9降0，感觉没啥太大差别
8 r# k4 Z' y* _+ J2、因为我做的是脐带血，时间一般都超过12h才能开始分离，最好的时候也要15h了，所以血液放置太久了
% Y  Q. @+ r3 U4 R7 a; c3、用50ml离心管，15ml的淋巴细胞分离液，加30ml血液，每次分离结果白膜层中都会有红细胞参在其中，只多不少。

孙帅帅

天津浩洋的用着还行~

hsu86

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3 e% A; T5 U' e; R5 Y) z% j
) d$ @6 ^+ }$ B) \那你看看是不是血液放得太久了 ，如果有条件最好去医院产科现采现用