酶解法分离脐带间充质干细胞，最后离心的问题

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最近在做脐带间充质干细胞的培养，分离时华能胶剥离的比较干净，采用酶消化法，组织剪碎后用胶原酶消化3h，得到的液体很粘稠，过BD的100μm细胞筛根本过滤不下来，于是直接离心1500rpm*5min,离心三次，可是觉得得到的细胞不是太多。2 A8 R5 Y$ X6 h" u  b1 c
请问消化完的细胞液是不是得用PBS稀释在过筛啊？之后的离心方法是什么样的？是不是要梯度离心啊？请各位专业人士帮我分析一下，怎么处理比较好，越详细越好，万分感谢

zhangruiting

如果酶消化后直接过滤会因为液体很粘稠，难以过滤，我们之前是用5到6倍的生理盐水稀释后，将碎片静置在底部，吸取上清离心，或者稀释后过滤；也可以用300目筛网过滤，不过也要用不断清洗，保证细胞能够充分过滤，离心转速你这个是可以分离得到细胞的，如果上清不是很清澈的话，可以延长时间或者加大转速，不过最好不要超过2000rpm，你可以试试看，希望能帮到你。

309208770

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9 {$ A" U! t; x: L
5 C& M* e7 ~5 m谢谢，我试试

chenlin080102

我们是酶解完后用400目细胞筛过滤，然后用15毫升离心管离心，每管加入5毫升酶解液，10毫升PBS，3000转离心10分钟，这样接种后第五天就能看到很多细胞长出来，这个方法我们这一直在用，没问题，可以试试

edwardellen

酶解消化完成之后，用大量的PBS稀释消化液，要看消化液的体积和消化情况，我都用至少是4倍以上体积的PBS，加完PBS以后，用吹打管吹吸混匀，多次，充分，之后再用过滤网过滤。

lyj-0017

回复 chenlin080102 的帖子* x( G% o$ |6 }

6 }7 ~5 e& e4 l  @( }/ B4 V. p请问你们的酶消化方案用的都是什么酶，多大浓度？消化多长时间呢？
0 R) i2 G9 z6 k' o另外，你离心用的是3000转，这个转速会不会太高了点？

lyj-0017

回复 edwardellen 的帖子4 i2 N) G2 s& O
! M; R: E7 ], g; \) D
请问) B! `( z5 `. A. h. A2 p: R+ q4 v' A
1、你们的酶消化方案用的都是什么酶，多大浓度？消化多长时间呢？如果后续要用滤网过滤的话，剩余没有消化完的组织块如何处理？1 |6 Y/ l* E! D! c+ t. E
2、获取的细胞进行培养一般多久会出现较多明显贴壁的细胞？' g; d" m* }9 D8 R4 U

壹DD

要是等7天，倒不如用贴壁法了，细胞超多