神经干细胞传代

clujyh430

提取新生鼠海马神经干细胞，传代两天后，发现有细胞贴壁分化，我的传代方法是用1毫升Accutase（sigma）37度消化10分钟后用200ul的枪头吹打70次左右，在消化的第五分钟是用200ul的枪头吹打30次左右，然后再继续消化，消化后的细胞悬液中发现仍然有未消化的神经球，我的培养基是DF12，EGF,bFGF,BSA,肝素钠，谷氨酰胺，葡萄糖，B27$ I3 D' i$ ?6 L1 H
大家看能做哪些改进，能保证细胞活力，又能消化彻底？

suning5

用机械吹打法，不要用酶消化。

clujyh430

机械吹打很难将所有神经球消化成单细胞悬液，起不到传代的作用，神经干细胞会越来越少

fm100200

我们培养的总是被污染  为什么，还有如何传代呢

NANCYWHN

机械吹打粗暴会对细胞产生损伤，而且不能保证完全悬浮。

clujyh430

有人用过加拿大Stem cell公司的NeuroCult™ Chemical Dissociation Kit (Mouse)，效果怎么样？

蜗牛爱贝贝

个人感觉，如果极少部分细胞不掉，那就算了，不要太过于纠结那些绝少的部分，有可能那些细胞本身就不是需要的细胞，即使时，他不掉也同样说明，他改变了

细胞海洋

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sunyandong

学习

Tim

回复 clujyh430 的帖子0 Z- y5 f0 U% u. y+ m( w

, ?* H3 ]# {% b. R1：枪头吹打次数太多。建议分次吹打。
8 {" F' _% J5 h# U% d/ i' w2：消化时间比较长。吹打和消化结合。7 |0 U$ Y1 b) g! l: g
3：你的培养基是用的什么？