原代脂肪间充质，细胞状态可以帮看看么？？

Cyclone2009

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图一：' `) `) i  ~1 U: d1 ]5 t# l# e; W; ]# H

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图二：
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Cyclone2009

培养液是DMEM+FBS+双抗+GlutaMAX 都是Gibco的。。
# i8 ~& [' W9 |# w. U3 N2 S# G大鼠来源

liuyanli123

培养基时没有问题的，个人认为脂肪间充质干细胞本身成分就比较复杂，参杂较多的成纤维细胞，所以在培养过程中有异样的细胞。真正评价是否为干细胞的标准除了相关表面标志物外，最好做做成脂成骨成软骨的诱导，看看是否具有多向分化潜能

蜗牛爱贝贝

培养基没有多大的问题，个人也同意楼上的观点，脂肪间充质干细胞本身成分就比较复杂，会有较多的成纤维细胞和其他细胞，原代培养过程中有其他细胞纯属正常。想要评价干细胞类型最好做下流式，至于做不做分化诱导，要看你的条件是否允许，如果按照脂肪干细胞传代方法，有可能会进一步纯化，个人观点，仅供参考，我也没做过这方面实验，仅代表自己的看法

ciweiyuan

我知道骨髓间充质都要用专用血清，那么脂肪来源的就不需要了？

干细胞谷

培养体系有问题，细胞传代后很难再长，从形态上看目前已经又大又薄了

caustic

1.像脂肪、胎盘、骨髓样本中的间充质干细胞的培养，本来就可能会出现一些杂细胞的生长（比如脂肪中可能会有成纤维细胞、成脂肪细胞等；胎盘中会有成纤维、血管内皮细胞等；骨髓中会有成纤和其他一些基质细胞），所以有杂细胞出现也比较正常，但是在传代培养过程中，这些成熟细胞逐渐失去贴壁能力，从而达到纯化的目的。
. Y7 H$ s/ y* d' Q$ V3 G6 F2.楼主P1代的细胞状态还不错，不知道是因为消化传代接种的密度问题，还是培养基配比的问题，细胞出现一定的老化和次级分化情况，其实就我个人观点来说，脂肪间充质干细胞一般也就能传个4-5代左右，再往下传就会开始出现次级分化了。

Cyclone2009

回复 caustic 的帖子, |' X3 `$ ]! a7 C
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感谢指点呀，我觉得你说的挺对。。7 |' R. D) `$ d2 d; v% b
最主要的原因可能就是原代P0时贴壁细胞太少了。。上面的图，P0形成的集落可能就是一两个细胞自己分裂克隆形成的。。增殖次数多了，细胞老化自然就快了吧？？
' T. n; F; j1 A$ I怎样提高P0时贴壁细胞的数目呢？？求大侠指导。
7 b" W, H# u' m- B6 r我一般是一只180g大鼠左右两侧腹股沟脂肪总共约10g不到，放到一个T25的培养瓶中。。操作步骤基本就是剪碎，0.1%I型胶原酶摇床消化30min，然后中和吹打，离心300g 5min，去上清，取沉淀用PBS悬浮，再离心，取沉淀接种。。
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caustic

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# a+ p) j, Y9 e& o  L
0 i) R" ]8 n8 p1 D提高细胞数，可以试试将消化时间延长，或者过夜，如果还是不行，那就只有提高样本的采样量了，一个小鼠的腹股沟只能取10g，那就多取几只小鼠的，或者是多部位采取，我们实验量一般差不多30g左右。

tanrufu

脂肪来源的间充质干细胞原代诱导本身存在的杂质细胞比较多如成纤维细胞、脂肪细胞等，原代培养期间可以适当的勤换半液，接种器皿不要太大，提高接种密度以达到缩短原代生长周期，保证同样培养周期内获得细胞纯度更高。