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$ N) H4 |4 K/ Z, ^! M1、实验室物品准的准备9 {4 P) L2 g) C2 K4 G1 ]
1.1 涡旋混匀器。* ^% L* U+ t; o: g1 w. n6 e8 Z
1.2 恒温水浴锅。7 O; z2 f6 D5 ?9 x8 f/ ]
1.3 鲎试剂（TAL）。
3 T; O, N" Q! p1 ?5 s; {1.4 细菌内毒素工作品（CSE）。& g+ l# W. F* Y" ]
1.5 细菌内毒素检查用水（BET），内毒素含量<0.015EU/ml。
2 }8 X9 f& u; y5 u1.6 无热原试管。
4 }9 B* \' D4 g1 i. _# @ }1.7 无热原吸头（200ul，1000ul）。% z$ a; O/ o" [
2、内毒素标准工作品溶液的配置
2 I* P8 Z# M, v: ^/ \* x2.1内毒素标准品溶液的配置. e( |- L# b' R3 M+ U* {
取细菌内毒素标准品1支，用酒精棉球消毒瓶颈，开启加检查用水1.0ml并混合15min备用。
% i, l, V9 F6 b6 t/ m$ H* A4 o7 y1 i内毒素标准品为10EU/支，鲎试剂标示灵敏度λ为0.125EU/ml时，内毒素阳性对照稀释至2λ，即0.25EU/ml。（注：横线上方表示取浓内毒素溶液的量，横线下方表示加检查用水的量。）; E7 H) y9 T* ~, I3 ~& ]: _5 U: u
10EU/ml 1.0EU/ml 0.50EU/ml 0.25EU/ml
; u' j# c, _' G6 C$ L2.2 供试品溶液的制备
) F6 [" r" b: y/ b有效稀释倍数（MVD），按下公式计算：
, N+ E- q& F' r' T: A9 N& kMVD=cl/λ$ d) e$ ?5 v1 y+ b# f- o: k8 I& ?
式中L为供试品的细菌内毒素限值；c为供试品溶液的浓度，当L以EU/ml表示时，则c等于1.0ml/ml，当L以EU/mg或EU/U表示时，c的单位需为mg/ml或U/ml；λ为鲎试剂的标示灵敏度（EU/ml）。
- N) m: x$ C6 Z( D如，细胞悬液其内毒素限值为2.0EU/ml，设所用鲎试剂的灵敏度为0.125EU/ml。' r! g. Y0 C, H( p1 E# k# u/ d! v3 i
MVD=cL/λ=1×2.0/0.125=16（倍）
, K+ a5 R( O) j4 Z* o) g* G Y7 C取供试品0.125ml加检查用水1.875ml，混合均匀做内毒素检查用。
/ ~. l: z) D! q( U8 v7 q2.3 供试品阳性对照液的制备
$ k' a: X0 r3 {9 F3 O5 d5 V' W: b分别取供试品的8倍稀释液0.5ml和0.50EU/ml的内毒素溶液0.5ml，混合均匀供检查用。$ Z! t9 ^1 v% ^1 b4 i
2.4 鲎试剂的准备
6 c# o5 e- q7 A8 e( }+ I根据供试品的数量，取鲎试剂0.1ml/支若干，按标示量加入检查用水复溶备用。
" j6 K' J2 Q+ @0 g! t6 T试验加样见下表1。+ o& }3 e# @) Y1 S2 F
表1供试品内毒素检查加样方法
& t, g- C0 l0 `: e% _) d* `5 @
- r" o+ Y- ^/ d, j
5 d) S1 H) S, E* I% ~测试组（A） 阴性对照 供阳组（B） 阳性对照* B' I( l" h4 x5 K- M
1号，2号，3号…n 1号，2号，3号…n 1号，2号，3号…n 1号,2号+ y% r; o8 G9 ?) J
鲎试剂溶液 0.1 0.1 0.1 0.1& K2 I5 B# f l
标本液 0.1
; K$ r( J+ r" n- V检查用水 0.1
# z) X2 @' m6 i; \. {供阳性液 0.1 ! |; e, z7 W3 C/ t
阳性对照液 0.1. Y- k% J: u, O3 W7 b
2.5 检测- l; m3 ?/ C. W7 o3 K# {
加样完毕，将试管中溶液轻轻混匀后，转移至试管内，用封口膜密封管口，垂直放入37℃恒温水浴锅中，保温（60±2）min观察结果。
3 j3 ]" E R) T! O7 A判读，时间截止将试管从恒温箱中轻轻取出，缓缓倒转180°，若管内形成凝胶，并且凝胶不变形，不从管壁滑脱者为阳性，未形成凝胶或形成的凝胶不坚实，变形并从管壁滑脱者为阴性（结果判读，当阳性对照都为阳性、供试品阳性对照都为阳性，且阴性对照都为阴性时，实验方有效）。
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发表于 2015-7-17 16:59
发表于 2015-8-9 15:54
