请教关于 H1和 H9的几个问题，关键词：死细胞，增值能力，单细胞不形成克隆团。

缥飘实验员

最近培养的 H1 发现，传代活率控制在95-98%，选择单峰区间活率更高（TC-20 计数仪），24h 换液的时候有些死细胞正常，然后去 Y27632 ，48h 换液的时候没有 Y 的支撑也有很多死细胞，也正常，但是72h、96h、120h 的时候换液都还有很多死细胞，以前培养的 H1没有出现这样的情况，形成克隆团大概72h ，换液就几乎很少的死细胞，且增值能力比较差，基本上是6-7天才能传代，我觉得控制在4-5天传代合适些，每次换液我会刮除边缘细胞，去除边缘效应，换液都很温柔，培养基复温是室温10-20min，更换了培养基之后也发现死细胞很多，增值能力慢，还请各位老师帮我分析一下。: y, B* D2 w8 u" \9 m7 @
3 {- R$ d1 s5 r% S( l! H
关于 H9在 feeder 上培养，然后采用克隆团的方法转到 matrigel 上培养，在 matrigel 上克隆团形成边缘比较松散，不知道正否正常。再次传代的时候使用 TrypLE 消化成单细胞培养在 matrigel 上，D2-D3会形成小细胞聚集体，但是往后很难形成典型的克隆团，呈现胞体很大的单细胞的富集。对于细胞形态不形成克隆团的问题在此像各位求助分析。谢谢！

缥飘实验员

命名的图片没有名字，好像失败了。第一二图是 H1培养近态，往后依次为H9培养近态，H9 在 feeder 上培养使用克隆团发传代到 matrigel，再次单细胞传代到matrigel，single cell 在 matrigel 细胞富集不形成克隆团。
2 f9 T$ B& y& z! }谢谢各位了！

开心果王

请问用的什么培养基！; O% C! S$ _, K3 P" ^# B4 I4 n

缥飘实验员

回复 开心果王 的帖子4 j3 j6 {' n4 ^2 z2 m
3 u3 D7 C, R* w! l; S7 Y
H1 是 stem cell 的 mTeSR1 ，H9 feeder是上海中科院的配方。H9 single cell 和 H1 是一个培养体系

20084720113

现在好像比较流行E8无饲养层体系

刘小明

我也遇到 这种情况，初步猜测是经常看细胞的原因

缥飘实验员

回复 刘小明 的帖子
6 H$ a  X  i+ N7 m) i% M3 @$ Y, @5 g
$ K& _% f5 L2 N0 B* c然后呢😄

刘小明

回复 缥飘实验员 的帖子7 H1 p5 R: E+ R3 n8 u2 T

1 {! O) H; g& N4 v然后现在不看了，结果还不知道

wangxiang

最后两个图的细胞都分化了吧，建议少用y27632，如果你是复苏的时候细胞状态不好加一点还可以，正常传代别加，细胞依赖了y27后会变的很脆弱，你一撤掉y27，细胞状态就会有影响。

吃呆猫

回复 缥飘实验员 的帖子/ a- ^6 x  M0 n0 A8 k) I
; A$ W) M, f7 D# v. l
你好，请问你养H9有出现D4天细胞飘起来的情况吗，不知道为什么，我用的stem cell的E8，matrigel铺板1：30。但每次传代细胞死的特别多，而且剩下的D3，D4还会飘起来