干细胞的复苏与冻存如何操作？

Sarge

第一步中，培养基预热到37度，有必要么，觉得细胞刚刚从冰状态下融化，37度的温度有点高吧，个人感觉还是室温或者室温低点的温度就行，让细胞和环境温度一起缓慢变化才对。

2014052

回答上面的问题，有的实验室认为只要液氮中有了支原体，一罐子细胞都会被支原体污染，但是在本人实验室，没有发生过这种事情，没被污染的，复苏之后照样不被支原体污染，所以，请问能不能告知你们用的哪家的冻存管？以后我等要封杀之！

fangtaoye

用内旋的冻存管，应该可以避免炸管了吧。另外想问一下大家洗DMSO的时候都是多少转速和时间合适，为什么这么设置，不甚感激

细胞海洋

回复 fangtaoye 的帖子
; |6 x+ m' a5 k  e% t; A. @" U( b) x1 n" _
建议你发新帖提问

周小木

复苏的温度我们用41度，是为了保证在1min内可以融化冻存液（不是全融），避免DMSO对细胞伤害；避免爆管可以在水浴之前把冻存管的盖子稍稍旋松（不是旋开），颠倒几下，倒出里面的液氮。。。

小豆芽

细胞复苏时，我们的一般是将冻存的细胞放入37℃水浴中融化，融化至细胞处于半冰半水状态。
9 f# o0 z$ Y: S/ W' k0 N冻存细胞时，冻存管放入程序降温盒中，后放入-80℃冰箱，然后再转入液氮中。

yooung

复苏时，感觉37度水浴温度有点低。我试验过从-80冰箱拿出装有1ml细胞悬液的冻存管放入37度水浴箱中到细胞悬液完全融化的时间为一分五十几秒到两分十几秒。由于冻存管的塑料材质有一定的隔热性，在37度水中水浴时，冻存管细胞悬液的实际温度会低于37度。我认为为了缩短融化时间，应该将水浴温度提高3~5度。

yooung

回复 fangtaoye 的帖子! I# j4 ^6 p; C

+ D5 u2 d' R# q7 p5 d1 ]1 m我们洗DMSO的时候的转速和时间和平常细胞离心的一样，1000rpm,5~7min。我认为洗DMSO时，还是从离心转速和时间对细胞最小伤害方面考虑，而不是怎样的离心转速和时间洗DMSO最干净方面。

yooung

回复 2014052 的帖子
, L, j( P6 ~  H# \+ \6 }. K" y7 v3 I5 F) r
1.不用液相液氮罐，改用气相液氮罐，冻存的细胞不与液氮接触，就不会被支原体污染。% z* E0 ?# g* y1 A6 L  o
2.如果还是用液相液氮罐，可从冻存管密封上面来考虑，例如说，冻存管管口缠上封口膜之类。

liqiang8589

我们实验室在用 Thermo science（life technology）的冻存管，冻存管爆炸还没有发生过。