脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

求教脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程

hengton

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8 h# k: N* d6 H& e( \
8 H) H; w& f" _6 @1 T
1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；
; p& [# c! h# R2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；3 }$ }( h! q* w3 E
3. 重复离心洗涤共3遍；
4 Q+ H7 G0 |  D4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；
3 A: s# h1 i& M! Z' ^, O5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；( C+ \  f' a5 R: M
6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；3 L" E/ G; A9 P! W5 M
7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。6 A' T+ l- U7 U0 p

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

张荣华

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; o) M+ ]3 D5 I# \
0 O. p( `( E  b! u请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

张荣华

回复 cheeray 的帖子  @8 \  r( S, t; Z% Y$ P

' l  V, g& ^& j  [1 D8 z不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15 3 J/ O% ?( e, ?
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- B7 ~2 ]4 t3 z6 \
2 \0 x' A- x) q6 I4 T2 B% g请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

$ b; n5 M% ]3 F1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。
4 A+ _  \4 |; A2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

回复 hengton 的帖子! p0 [( C' u( K, \. |$ W
# Z$ z  d6 k' ~4 i$ I% e
我用的是GT-551培养基  

鸵鸵

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" O# {& a2 u5 l# P9 J, O, e5 H- Q! n1 A2 L8 _6 ~( v6 h, ^0 ~1 e
我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

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好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？