脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程 刚开始做希望大家多多帮忙

张荣华

求教脐带血CIK细胞的详细制备及培养过程

hengton

; ~. W6 \. W- n2 U; T1 A0 ~& o# w4 d! r' @9 ~6 G0 `# i
2 I5 ~0 @& U9 G' g: {
1. 将分离机采集细胞缓慢加在细胞分离液上，体积比为1:1，800g，室温离心20分钟；9 T7 w* N$ ]. w! A3 w
2. 收集界面的白色絮状细胞加入30ml的低糖DMEM培养基，轻轻吹打混匀，300g，室温离心10分钟；% P  E0 G1 Z" x9 h: Z5 r
3. 重复离心洗涤共3遍；
% f, i0 P3 V6 V3 E0 Y) [4. 收取细胞轻轻吹打混匀，加入无血清培养基及IFN-γ 置37℃、5% CO2 孵箱中培养；8 Y4 C+ }+ u- u% }) @6 c
5. 24 h后加入IL-2 ，CD3 ，IL-1  继续培养，；
0 z/ l0 d/ d5 E( H6. 每天观察细胞生长状态并根据情况进行换液及加入IL-2 进行扩增；9 ^/ E! v0 Q; {% p% t" Y! G
7. 细胞收集：第14-20天收集细胞，离心弃上清液，用生理盐水洗涤细胞2 次以上，重新混匀，悬于100～200 ml 输注用生理盐水中。
( {) q+ @$ N- P; Y2 d

zgzy

建议在培养第8天左右及回输病人前做细胞质量检测及活性检测，以确保安全性和细胞活力

cheeray

脐带血 应该跟采集外周血培养差不多吧。。

张荣华

回复 hengton 的帖子- _, A7 X' \* \& m
' o- C9 d+ x# N) C9 T! m- Y6 f: {
请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现溶解的状态，细胞膜开始模糊，这是什么原因呢

张荣华

回复 cheeray 的帖子2 `& c3 h  _: x! h7 c

1 ]9 J1 l( k9 q( k: {不知道是不是差不多，那你们外周血的过程是怎样的？能否让我参考一下

hengton

张荣华 发表于 2015-8-25 15:15 : f  n* J: f" _8 s( X) N
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6 o8 B8 v6 C5 h
. k' N5 F( |/ u请教CIK细胞刚开始的接种密度是多少比较合适，我养的细胞大概在7天左右细胞就开始出现 ...

# i6 B( w0 V0 Y/ S4 G% G1、密度一般是保存在1.0-2.0*10^6个/ml左右。这样细胞生长比较好。
1 T9 w+ C) f! R) l; {2、你用的是什么培养基，会不会是NaCl浓度导致的细胞胀破？

张荣华

回复 hengton 的帖子8 b" ?* U& i. r/ U/ _0 p3 L1 v

* X0 k5 ^( R( b( }. c) u( O我用的是GT-551培养基  

鸵鸵

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; H) f$ _, i8 U( L6 g
2 V2 r8 Q! r9 [, w6 K0 Q1 C我们用的是1640，接种密度和楼上一样，没有出现过细胞破裂的情况，而且细胞在5-9天是增殖高峰期，建议楼主换一种培养基做下对比实验看看

张荣华

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* _) r- F( w* y& o# I/ `' l
2 d# l/ @/ [9 r5 @6 D8 d6 V好的，谢谢你！还想请教一下你们吸取白膜层大概能吸取多少毫升？