急求：H9 or H1 embryonic body culture protocol，跪谢！

缥飘实验员

打算做一个H9 and H1干细胞的 EB 形成实验，我现在的培养体系为 mTeSR1-matrigel  体系，求一份详细的 EB 形成实验 protocol，谢谢

nichifanlema2

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1 c* o6 Q1 P$ J/ J" Z3 h, J你用的无feeder的培养体系，可以用胶原酶IV消化成小细胞团，消化时间可能长一些，大约30min-50min左右，也可以用其它可以消化成小团块的试剂，收集后用无bFGF的ES培养基（也有用MEF培养基的）重悬，然后放在低吸附密度的培养皿中，悬浮培养4-7d就可以，每隔一天换液。

缥飘实验员

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6 z. \/ ~  G/ y4 A4 G7 n7 t+ W5 R
谢谢，我做了单细胞的悬滴和悬浮培养，以及克隆团的悬浮培养，现在想问问关于换液的时间以及方法，谢谢！

nichifanlema2

回复 缥飘实验员 的帖子2 I% A1 a' T) c3 a
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每隔一天换液即可，换液时将培养物静置一会收集，去掉上清换成适量新鲜的培养基，继续悬滴或者悬浮。悬滴用的培养液很少，换液次数要多些，如每天换液。人的ES悬滴法不如悬浮培养效果好。

缥飘实验员

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, f" a# W+ T& V8 l% C+ G非常感谢，我48h 都换液了，悬滴的转位悬浮培养了，悬滴的球球最好看，但是成功率只有50%，悬浮的克隆团的球球和悬滴的差不多，单细胞做的就很小了，单细胞是1000个 cell /ml。谢谢，希望再请教

天龙八部

汇合度90%的细胞，弃上清用PBS洗2遍后用dispase消化约20min，用枪头刮成小块转移至低吸附培养板中培养4~7天，隔一天换一次液。我们低吸附的培养板是重复利用的。。。。。

liu23huan

回复 缥飘实验员 的帖子  S( k3 ]# \- O" t. `
( ]0 c, w% f$ K
您好，看到您的帖子，我想请问下你们的hESC细胞株H9是从那里购买或获得的呢？我在做iPSCs鉴定，需要这个，谢谢您