采血管抗凝剂的选择

醉心科研

看了这么久，学了不少东西，我也贡献一点吧，赚点人气。, E( y7 Q8 _( [) s) X
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免疫细胞培养之前采血，一般都用肝素钠抗凝管采血，也有的用枸杞酸钠，但都没有用EDTA抗凝的。; }1 P$ t% `9 I: S
之前没有注意到这样的问题，也不知道EDTA行不行。. o$ E+ k' c* {, }, u
后来查找到这样一篇资料，比较三种抗凝剂的影响。: h5 m) @2 F: f1 E7 p6 y( _
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不同抗凝剂及保存条件对 CIK 细胞培养的影响
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目的：探讨不同的抗凝剂及血液保存时间对细胞因子诱导杀伤（cytokine-induced killer,CIK）细胞的增殖和功能的影响。方法：实验分两个部分，首先检测不同抗凝剂对后续培养的影响，采集健康志愿者外周血，添加 EDTA、肝素钠、枸橼酸纳抗凝，采血后 2 h 内完成操作，CFSE 染色法检测后续培养中细胞的增值能力；第二部分，采用肝素钠抗凝，采血后在室温（约 20 ℃）、4 ℃冰箱中分别放置 0、4、8、24 h 后，进行培养，CFSE 染色法检测后续培养中细胞的增值能力，流式细胞术检测 CIK 细胞中 T 细胞亚群比例、颗粒酶、IFN-γ、穿孔素的分泌情况，以及培养 11 d 细胞对 Hela 细胞的杀伤作用并检测 CIK 细胞的增值、活力和细胞毒作用。结果：EDTA 抗凝时，CIK 细胞扩增数量无明显变化，于第 7 天开始出现迅速下降，并趋向于零；肝素钠抗凝时，CIK 细胞扩增数量在第 5 天开始出现明显上升，于第 11 天达到高峰，细胞数量比起始培养扩增 14.33 倍，之后迅速下降；枸橼酸钠抗凝时，CIK 细胞扩增数量在第 9 天出现明显上升，于 11 d 达到高峰，细胞数量比起始培养扩增 12 倍，之后迅速下降；使用肝素钠抗凝，从实验结果来看，所培养的 CIK 细胞分泌 IL-12 的能力明显增强。相对而言，常温下即刻分离细胞和 4 ℃的条件下保存 4 h组，分泌情况最佳，而 4 ℃的条件下保存 24 h 和室温下保存 8 h，有明显下降。常温下即刻分离细胞和 4 ℃的条件下保存 4 h 组，CD3+CD56+，CD3-CD56+的比例略高于其余各组；而 4 ℃的保存 4 h 条件下培养出来的 CIK 细胞群中，CD4+CD25+细胞比例要略低于其余各组。各组 CIK 细胞均可以表现出一定的杀瘤活性，常温下即刻分离细胞和 4 ℃的条件下保存 4 h 组杀伤能力最强。结论：枸橼酸钠和肝素钠均可以用作CIK 采血的抗凝剂，肝素钠的效果更佳。而使用肝素钠抗凝后，血液标本在常温下 2 h、4 ℃时保存 4 h，不影响后续细胞培养的效果。
6 i* p: X$ k6 |关键词：细胞因子诱导的杀伤细胞；抗凝剂；增殖；细胞毒性

baby00000003

如此说来EDTA当真做CIK不好....因为有些个2价离子参与免疫细胞增殖的信号通路了？

醉心科研

回复 baby00000003 的帖子
" ~# S7 C- Z* |. |$ `& Z+ e9 l; }: e+ ]4 o/ \- Q, I  H
原理确实不太懂。
* \) C4 P4 ]" J2 f7 I$ J以前听说过钙离子信号通路，似乎与基因转录有关？

小刘

现在我们常使用的是肝素锂和肝素钠，防止血液凝集

Michael_HT

肝素钠采血，样本处理起来也方便，直接上样梯度离心

本心

大赞楼主

aochongyu

很好的对比试验，我们常用的是肝素锂9ml采血管，一般放置不超过4小时。

醉心科研

回复 aochongyu 的帖子# @* B: i0 Z6 \: T! [# s- b
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咳咳，声明一下，不是我做的哈。2 M+ V/ U3 B4 Y& X( c2 h
网上找的一篇会议摘要，发的时候有作者的，可能版主编辑掉了。

yingfeixiang

回复 醉心科研 的帖子6 f" r5 J* L9 l6 m+ e' u
3 S7 d% l" Y- Q% @$ Y6 y
好贴

剡溪兰客

真的假的