关于少量样本总RNA提取方法请教

芦苇浅

最近流式分选了约10000个细胞，接下来提取RNA并反转录进行qPCR，请问大家有没有使用QIAGEN的试剂盒提过这么少的细胞，我的提取量只有3ng/ul，是否还有更好地方法适用于提取少量样本细胞？谢谢！

wuhuaguo88l

细胞是不是太少了，看一下QIAGEN的试剂盒说明书所需细胞数，还有3ng/ul的量实在太少，应该很难满足后续实验要求，也可以看一下反转录试剂盒所需RNA最少量。

aulenuyah

我记得以前用过Invitrogen的一个从少量细胞里提取RNA的试剂盒，楼主可以查查

芦苇浅

回复 wuhuaguo88l 的帖子4 B# m& @# a- h4 Q! p- M4 ~* @
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kit表明了最少可以低至100个细胞，但是也没有给出100个细胞能提出多少RNA。还有Bio-Rad的反转录和real-time PCR 试剂盒的template需要量都在pg-fg之间，按说应该能满足要求。但是实验结果不好，就是想知道在细胞量少的时候用kit提RNA是不是不如手提RNA合适呢？

wuhuaguo88l

RNA纯度是多少，A260/A280的比值接近2.0吗？按你说的，至少QPCR会有扩增曲线的。

yeahjl

之前找试剂商定过Life Technologies得微量miRNA试剂盒，The Ambion® RNAqueous®-Micro Kit is designed for isolating total2 t: n- g; |" \# C4 [: ]5 K
RNA from micro-scale samples, including cultured cells(≤500,000 cells), tissue samples (≤10 mg), and microdissected tissue。2 N$ w5 X8 G+ U  ]. s! m3 c
你可以去官网上下载说明书看一下，具体步骤比普通的抽提过程复杂一些，专门抽提微量的RNA

芦苇浅

回复 yeahjl 的帖子* p7 e: M5 r1 C% }% f8 ^& X
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好的，非常感谢。请问您在使用这个kit的时候大约提多少细胞，能够收到多少的RNA呢？想借鉴一下您的经验。

yeahjl

我只用了一次，剂量忘记了~，只是记得细胞数很少，实验室的RNA定量仪是国产的，貌似当时查的微量RNA需要用Nanodrop的定量比较准确

做个好孩子

楼主的这个提取量确实有点少，而且RNA容易降解个人觉得还要需要从提量下手，我们实验室用BIOG提取处理的样本量可以达到1500μL，我看到其他论坛做过的同学也提到用Trizol LS提取的