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怎么将出生后0-3天雌性小鼠的生殖细胞和颗粒细胞分开？
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作者:
chenchunlei
时间:
2012-9-7 15:16
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怎么将出生后0-3天雌性小鼠的生殖细胞和颗粒细胞分开？
贴壁？最好能有实验操作步骤
作者:
aulenuyah
时间:
2012-9-8 00:38
你这是要分离卵母细胞吗？老鼠太小了呀
作者:
chenchunlei
时间:
2012-9-8 11:20
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aulenuyah
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5 {, V+ t; f2 |4 M% _1 C
8 H! z" z/ k- v/ j! x
要颗粒细胞
作者:
aulenuyah
时间:
2012-9-9 10:52
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chenchunlei
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! C# Z! [$ Y; @' G
) S/ X7 [* L3 Y5 a
什么样的颗粒细胞？就是腔前卵泡上面的颗粒细胞吗
作者:
chenchunlei
时间:
2012-9-9 13:39
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aulenuyah
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! W3 m4 A' R& I; S" j7 l
5 ]8 Q+ j, @3 z, Q4 n) C8 F3 U( d
就是将0-3d卵巢消化后怎样获得颗粒细胞
7 B' P& v! U* F& Y. `% F
作者:
aulenuyah
时间:
2012-9-10 01:02
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chenchunlei
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& Y% H& v% `/ F; \; s2 X' v
$ D2 P; ~4 d# ?+ ?1 z0 k1 U
我以前取过成年小鼠的。建议你不要直接消化。先在显微镜下将卵巢用异物针撕碎，然后用0.1%胶原酶吹打消化，之后再显微镜下将腔前卵泡检出，然后单独消化腔前卵泡，这样得到的颗粒细胞会比较纯净。因为你要做的是幼鼠，尚无有腔卵泡的发育，只能取腔前卵泡，而且不管怎么样，细胞都不会很多，如果细胞需要量大的话，就只能多杀老鼠了。。。
作者:
chenchunlei
时间:
2012-9-10 10:18
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aulenuyah
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9 i0 v1 h! H1 }) a, }) K- I# N
) e) f: {7 B6 ]- z! M6 h* _
谢谢
1 w1 W4 S/ f) @0 E ?
之前用了四个卵巢一消化离心后几乎没有颗粒细胞了
作者:
aulenuyah
时间:
2012-9-10 15:25
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chenchunlei
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( M' o6 @. M9 p# c6 N0 g/ b& k. i
^6 v$ Q7 L1 ^ ^% \
如果这样的话，试试看不离心
作者:
chenchunlei
时间:
2012-9-10 20:01
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aulenuyah
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8 ^8 w- s- r% S( E1 @
! f0 H* e( q6 [$ l* a1 _
那岂不会有TE在培养液里
4 u9 `) m! R( I, ? m1 h
作者:
aulenuyah
时间:
2012-9-11 13:33
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chenchunlei
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! T+ h7 a- W4 V, H& Y
9 d- G9 z5 W5 A0 N; j, r2 t
怪不得你弄不出来呢，一般消化颗粒细胞需要用透明质酸酶消化的，如果没有透明质酸酶也可以用胶原酶（0.1%浓度）代替。胰酶的作用太强烈了，颗粒细胞很脆弱，而且还那么少，受不了胰酶的。
作者:
hcluo
时间:
2012-9-11 14:28
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chenchunlei
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+ i/ G# @+ y" g. ]& h
& ^! W; ^ r) g, [5 D, S6 G. O
刺破卵巢后，释放的出来的卵丘细胞，然后用透明质酸酶消化5分钟，吸去卵母细胞，剩下的基本都是颗粒细胞了。
作者:
chenchunlei
时间:
2012-9-11 22:12
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hcluo
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) N4 G; C$ K- q5 r8 M8 x
% H8 Z( q: `" [5 a& n6 x. `
这时候的颗粒细胞和卵母细胞直径差不多吧
7 M8 Z7 p& O7 I+ k4 L; H! w; ^, ~
作者:
chenchunlei
时间:
2012-9-11 22:21
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aulenuyah
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- B4 w% |% W# a8 x
% w3 X3 P$ K* J$ h
也用过胶原酶啊
0 o0 l) u2 y, Y' W! x. ^% z3 @+ Z# e
作者:
aulenuyah
时间:
2012-9-12 00:37
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chenchunlei
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2 B4 \5 j" \* P+ h* f: r
. m. x; G4 P/ K* _
效果也不行吗？
* M& T: t: V. G% n! I. F4 X: }
用的什么浓度的？其实最好用的好像是透明质酸酶，专门消化颗粒细胞的
作者:
aulenuyah
时间:
2012-9-12 00:39
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hcluo
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% ^# w0 }! f1 }: C5 z9 S
& b5 L4 J( b5 \$ x0 b
楼主要用的是0-3天的小鼠，那么小的小鼠不会有什么有腔卵泡的发育，所以根本没有卵丘细胞的。不然的话，先超排，然后刺破还是会挺多的
作者:
chenchunlei
时间:
2012-9-12 11:18
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aulenuyah
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6 b1 t3 ^, R) ^: b, a" ]0 k) |
$ }- n" C$ w$ J$ q( v) ^4 G+ } A
谢谢
8 B0 K# O$ o7 L" Z% }
作者:
chenchunlei
时间:
2012-9-12 11:20
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aulenuyah
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* s7 @$ f, U I+ i( z
# a9 D# i3 o- @" b
那时候应该Cysts应该刚解聚完吧，应该都处于原始卵泡阶段。
作者:
aulenuyah
时间:
2012-9-12 16:02
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chenchunlei
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: [9 D4 l0 _6 c, r2 \+ D
所以个人觉得如果需要颗粒细胞，只能通过获得原始卵泡或者腔前卵泡的方式获得。这种方法我试验过，获得腔前卵泡之后，在培养液微滴中培养，之后成功迁出颗粒细胞了
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