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标题:
CIK细胞培养补液
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作者:
fsj1987
时间:
2015-7-14 09:04
标题:
CIK细胞培养补液
我是一个新人，现在刚接触CIK细胞培养，在培养过程中，第0天T-175培养瓶30ML培养基LONZA,细胞接种量是10的8次方，第三天全量换液，之后转入培养袋，，以后补液量根据什么啊，哪位大神可以告诉我啊？求赐教。
作者:
snowny007
时间:
2015-7-14 10:32
细胞的培养密度、培养基消耗，一般2-3天患液
作者:
snowny007
时间:
2015-7-14 10:32
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snowny007
的帖子
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9 a3 D0 ]1 @* {; x ? R
补液不是患液
作者:
hurn208
时间:
2015-7-14 13:24
好东东
作者:
aochongyu
时间:
2015-7-14 14:14
cik是悬浮细胞，不用换液吧，一般都是补液
作者:
gondobar
时间:
2015-7-14 16:12
第0天T75培养瓶30ML培养基,细胞接种量是10的8次方，接种密度很高。
4 N9 _5 ?* g0 A$ z
第三天全量换液不知为何，CIK一般不需要换液，直接补液即可。
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转入培养袋时间也过早。
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培养流程不科学。当然也许你方法独特，不做过多评价，加油！
作者:
fsj1987
时间:
2015-7-14 17:23
首先很感谢大家的经验回答，我也不太懂，CIK细胞不换液的道理是什么呢？补液量跟细胞密度怎么掌握啊？有没有文件性的东西可以发我参考吗？或者是可以把你们的培养补液流程发我吗？非常感谢！
作者:
suoweiyiran0411
时间:
2015-7-15 09:15
因为CIK是悬浮生长，所以一般是补液，全量换液的话需要离心，也会把细胞分泌的细胞因子离掉，可能不利于细胞的生长，当然直接补液的话，里面会残留细胞的代谢物，也有可能对细胞生长不利，当然是猜测啊，没有实验性证据，只是对比过全量换液和补液的方法，基本差不多，所以从操作方便的角度考虑，基本采取补液，仅个人观点。
作者:
fsj1987
时间:
2015-7-15 10:37
啊，我在全量换液之前是需要静止30分钟到一个小时的，还想请教几个问题1.做流式是一般第几天做，用多少毫升培养液？细胞密度是多大？
1 E4 N& [ O& N- Y' |" u
2.培养过程中，细胞密度和培养液量应该保持什么关系呢？是始终保持在10的六次方还是多少（每ml）
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* ]) G$ S. O( G( Z8 r! o% ?, ]5 u! |8 C
谢谢
作者:
cloudycity
时间:
2015-7-15 10:39
做cik没有换过液，就一直补液加因子。一般都是2-3天倍比。
% H: N- B- i9 x2 t- O& {/ K
我觉得应该看密度，太稀太浓都不好。加液量我觉得还是可以灵活控制的， 长得好几倍几倍加，涨的慢的就少加一点。
作者:
colins
时间:
2015-7-15 10:48
接种密度太高，按照的你的接种量那得需要多少外周血啊，哪个医生也不敢抽这么多血啊；转袋也太早了，转袋以后补液就行了，简单方便，你转袋不就是为了大规模培养方便，可以倍比加液啊
作者:
gondobar
时间:
2015-7-15 11:06
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fsj1987
的帖子
) I6 U+ K- M/ o- H; m2 b+ _
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1.做流式一般回收时候做，不用培养液。PBS悬浮1*10·6。具体看流式细胞仪要求。
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2.培养过程中补液一般控制在10·6次/ml,补液看细胞密度和培养基颜色。
作者:
eeel
时间:
2015-7-15 11:18
补液 主要看细胞生长状态，比如CIK的抱团大小，培养液颜色变化情况，红〉微红〉微黄〉黄等，以及细胞生长阶段的不同。虽然有客观指标可依据，但是在操作中没有直观的经验来的实际、可操作性强。
作者:
fsj1987
时间:
2015-7-15 11:52
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colins
的帖子
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培养的样本是健康人的外周血40ML，那什么时候转比较好啊？
作者:
fsj1987
时间:
2015-7-15 11:55
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gondobar
的帖子
5 V: \$ c" o7 M( w1 c
! Z2 j" |: E) Q3 g$ V
我今天做得流式，要求1ML，但用的是培养基稀释的，细胞悬液细胞密度控制在1-5*10的6次方，不明白为什么？
作者:
colins
时间:
2015-7-15 13:31
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fsj1987
的帖子
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我们养的是病人的外周血CIK，接种密度一般控制在每毫升6次方左右，根据生长情况大约3天倍比补液一次，T175的培养瓶装60mL的培养液不成问题，健康人的外周血可能会长的快一些，具体什么时候补液需要经验指导。希望对你有帮助
作者:
fsj1987
时间:
2015-7-16 09:44
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colins
的帖子
5 T! [! N6 ~' f6 {4 l
! y2 y0 V; d% m! F; o0 T
您的意思就是从接种到培养结束始终保持密度在10的6次方左右就可以对吗？不知我是否可以这样理解
作者:
gondobar
时间:
2015-7-16 12:45
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fsj1987
的帖子
5 E- R: u! D7 E X
6 G9 M2 Y' Y1 u" l* m* G
流式细胞仪要求的检测范围大概就是1-5*10的6次方。1mL这个数值是无所谓的，进样量比这少，但是一般给个几毫升无所谓。
作者:
colins
时间:
2015-7-16 13:31
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fsj1987
的帖子
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2 k% k/ L" E- f! P
是的，基本上都在6次方左右，感觉养的还不错
作者:
fsj1987
时间:
2015-7-16 16:28
学习了，谢谢大神们。明天发个流式结果大家帮忙看看
作者:
fsj1987
时间:
2015-7-16 16:40
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gondobar
的帖子
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我的原液达到10的9次方，做流式的说10*6到10*9次方都可以，那我直接用原液不就可以了吗？是不是所有流式都必须采够细胞个数10*6次方才可以啊？
作者:
gondobar
时间:
2015-7-17 08:57
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fsj1987
的帖子
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淋巴细胞亚群测定
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原理：双/三色直接免疫荧光法。荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中， 与白细胞膜上相应的抗原结合，经过溶血、洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析，从而得到淋巴细胞亚群的百分数。淋巴细胞表面抗原分布如下：T淋巴细胞：CD3+；B淋巴细胞：CD5+，CDl9+；辅助性T淋巴细胞：CD3+CD4+；抑制性T淋巴细胞：CD3+CD8+；NK细胞：CD3-CDl6+56+等。根据淋巴细胞膜上CD分子表达的不同，流式细胞仪可以分辨出淋巴细胞及其各种不同的亚群，利用计算机软件计算出淋巴细胞亚群的百分数。
2 f v" _& L. E3 V2 R
要求1．样本量至少1ml。
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2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻的标本不能用。
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3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。若>10.0×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。
作者:
fsj1987
时间:
2015-7-17 16:27
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作者:
fsj1987
时间:
2015-7-17 16:55
怎么才能上传图片 啊
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作者:
小刘
时间:
2015-7-18 15:18
简而言之，就是根据细胞密度进行分批次的补液，一次补太多会导致营养过剩，补液量不足又会导致细胞由于营养缺失影响其生长，补液就是你饿了吃点饭，人多了饭就多做点，人少了少做点
作者:
细胞海洋
时间:
2015-7-20 09:47
本帖最后由 细胞海洋 于 2015-7-20 09:48 编辑
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! F9 M- T$ U/ d2 c6 X
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fsj1987
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) M0 t u2 o# a9 [5 X! @2 S
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发帖 或者 回复 高级模式 附件上传 单个图片不要大于1000kb
7 w( z' c6 p# q. c4 ?3 P
作者:
伊诺强
时间:
2015-7-20 10:12
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fsj1987
的帖子
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* z' ?: E/ T9 k
CIK换液一是浪费，二是不现实（后期量会特别大）。细胞密度当然是计数了，补液多少也是通过计数结果换算出来的最终浓度来补的！
作者:
yingfeixiang
时间:
2015-7-21 15:45
都是补液，一般不换液的。
作者:
ch15594152551
时间:
2015-10-19 09:27
主要是根据细胞的密度来补液，主要是靠血细胞计数仪，感觉手动计数结果准确点
作者:
御剑红尘
时间:
2015-10-19 11:06
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fsj1987
的帖子
8 a$ I$ x" v A" s& M
, X; o9 \' f1 Z4 g/ v- j
CIK最好是补液，如果真想换液最好离心再加液，你只静置细胞再换液，容易造成细胞损失。
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1.流式一般在回输当天或前一天做，看你时间安排。流式一般每组至少1万细胞，太少的话误差太大，收集的细胞越多，才有意义。取得培养液看你的密度。
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2.培养过程中，一般调节密度1.5-2×106，根据计数调节培养体积。
作者:
houlili198572
时间:
2015-10-19 11:36
全量换液前为啥要静止呢？
作者:
zhengjianwei521
时间:
2015-10-20 11:32
好有钱啊，这么贵的培养基，不用看细胞量，看培养液的颜色变化
作者:
本心
时间:
2015-11-2 12:55
当天接种密度1-2乘以10的6次方，不要换液培养，在4-5天转袋培养
作者:
Anne_Yu
时间:
2015-12-7 14:43
根据细胞的生长情况，培养袋主要看培养液是否变黄，瓶子的话可以根据显微镜下观察到的细胞状态进行补液，一般也是2-3天按倍补液。
作者:
Anne_Yu
时间:
2015-12-7 14:43
根据细胞的生长情况，培养袋主要看培养液是否变黄，瓶子的话可以根据显微镜下观察到的细胞状态进行补液，一般也是2-3天按倍补液。
作者:
guanjun1314
时间:
2015-12-8 11:21
不知你是怎么换液的，不当的换液会导致细胞、因子流失吧，我们都是直接补啊，只要看生长情况，外观看颜色，显微镜看密度。
作者:
huihui120
时间:
2015-12-9 16:40
根据细胞密度1.5-2.0X10^6,培养基颜色，不用换液，直接往里补液就可以了
作者:
312473313
时间:
2015-12-17 15:55
CIK培养不需要全量换液吧 ，一般都是补液间隔都是3天左右，实际根据培养基颜色变化以及细胞的生长状况决定什么时候补液，而且转袋时间也过早大多都在5天才转袋的
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