脐带贴块法间充质干细胞培养原代细胞生长少

jifengtang

最近一直养脐带MSC，采用贴块法培养，但细胞长得不好，T175一瓶贴块约50块，只有2~3块爬出细胞，请教是什么问题？
( D7 W' Q/ @( `4 H+ i" z3 Q
% V: B1 C7 W. ^! v5 ?( }! i具体操作：
" H: N8 b6 @9 C, c1、脐带PBS+双抗洗后处理，剥离血管。! S7 c1 V$ T. e8 k; t, I
2、洗洗剪碎成2mm3左右小块。6 p, o+ G' N, L" d3 O: e
3、培养瓶用培养液润洗过。: B, A1 W$ D% V6 J9 X6 x
4、放好块倒置培养过夜，T175补液至20ml，每5天换液一次。3 K0 l; i, f2 u) ?
5、培养液：DMEM+FBS+双抗。3 K$ K$ ]7 j: a; ?0 {$ n8 Y+ e

木头1102

有可能是脐带的个体差异，或者放置时间过长；培养液如果配好之后放在4度冰箱时间长了，效果也不好。你是第几天观察到2-3块爬出细胞的，如果时间不是很长，可以在等等；如果时间挺长了，就传了吧，注意传代时细胞密度，可以把瓶里的组织块二次贴壁或者消化了，看能不能再获得点细胞。还有就是，组织块贴壁法最好只用华通氏胶。

jenny114402

我们都用皿培养，你可以试试悬浮法培养，操作简单，正常基本7，8天长出细胞吧

haibara007007

回复 jifengtang 的帖子
. n6 I$ P2 q( u% h$ u1 a8 R; e& Z1 p$ ^4 w- Y8 r( d* y8 n
你可以试试把脐带剪得再碎一些，多贴一些，应该会比较好，我们现在都贴很小很多块，贴三个75t，这样基本都可以爬出来

张杉杉

我也是新手，刚刚开始养脐带间充质干细胞，静置7天后观察，一个细胞都没长。不知道是脐带原因还是什么？

jifengtang

回复 木头1102 的帖子$ t9 b" l$ f- D
: l6 }1 [9 S6 _: E4 _" v
基本是9~11天有细胞爬出，2~3块，然后一周后还是只有这2、3块有细胞，其他爬不出来。做了好几个脐带都这样。个体差异是不是和母体有关，我做的母体年龄较大，都在30岁以上？

jifengtang

回复 jenny114402 的帖子4 [5 j! \8 i( G, {6 i

, {, t- l1 Q" f9 l9 j4 U, K悬浮法？是指酶解法吗？

jifengtang

回复 haibara007007 的帖子" \$ M: ~6 o& v- D: X0 S: N" C

8 F, \" _: U4 D! r大概多碎？我现在剪成大概芝麻粒大小，再请教下。贴完后补液换液你是怎么操作的，我基本前3天补一点点保持湿润，第四天没块。

jifengtang

回复 张杉杉 的帖子
9 y3 p+ W) L; o$ S6 K8 t% h4 G' e- Z9 _0 x) t, r2 ]0 P8 t
培养液，血清用的什么？

张杉杉

回复 jifengtang 的帖子
3 S1 m8 l3 W! _& ~- ?' G
( |7 t  `6 f+ O" `+ i培养液用的HyClone的α-MEM培养基，Gibco的血清。已经静置培养7天，第八天换液后，又静置四天，今天观察培养基颜色，没有变化。