脐带贴块法间充质干细胞培养原代细胞生长少

jifengtang

最近一直养脐带MSC，采用贴块法培养，但细胞长得不好，T175一瓶贴块约50块，只有2~3块爬出细胞，请教是什么问题？
1 i; z" V7 D+ ]# c6 D: E
1 X1 i0 s! v2 L, F9 D. D具体操作：+ J) K* f( {& R" U, R
1、脐带PBS+双抗洗后处理，剥离血管。* U* f1 b' z5 }
2、洗洗剪碎成2mm3左右小块。
# Z; b( I1 N, }: k9 P3、培养瓶用培养液润洗过。  y1 W/ e  t% K- Z' J" Q' q3 i
4、放好块倒置培养过夜，T175补液至20ml，每5天换液一次。7 C; a. z% X. _
5、培养液：DMEM+FBS+双抗。
4 o: N. K4 g' Y- Z6 Z8 i! A$ H

木头1102

有可能是脐带的个体差异，或者放置时间过长；培养液如果配好之后放在4度冰箱时间长了，效果也不好。你是第几天观察到2-3块爬出细胞的，如果时间不是很长，可以在等等；如果时间挺长了，就传了吧，注意传代时细胞密度，可以把瓶里的组织块二次贴壁或者消化了，看能不能再获得点细胞。还有就是，组织块贴壁法最好只用华通氏胶。

jenny114402

我们都用皿培养，你可以试试悬浮法培养，操作简单，正常基本7，8天长出细胞吧

haibara007007

回复 jifengtang 的帖子
9 x( p7 e2 M  |/ z! Y$ h7 q3 _5 K9 \4 h$ \; r/ Y: V
你可以试试把脐带剪得再碎一些，多贴一些，应该会比较好，我们现在都贴很小很多块，贴三个75t，这样基本都可以爬出来

张杉杉

我也是新手，刚刚开始养脐带间充质干细胞，静置7天后观察，一个细胞都没长。不知道是脐带原因还是什么？

jifengtang

回复 木头1102 的帖子( M, b+ U: _+ K0 R
+ Z( P+ T  W: ?# g" b: B1 k- w
基本是9~11天有细胞爬出，2~3块，然后一周后还是只有这2、3块有细胞，其他爬不出来。做了好几个脐带都这样。个体差异是不是和母体有关，我做的母体年龄较大，都在30岁以上？

jifengtang

回复 jenny114402 的帖子
2 I0 K) w" i1 F; T/ _# f: J# E& {( H+ ~0 u" N8 b
悬浮法？是指酶解法吗？

jifengtang

回复 haibara007007 的帖子$ _) S3 w1 r# A$ E+ c( ]1 z
' }4 I' o+ x- {8 i3 M8 i7 w
大概多碎？我现在剪成大概芝麻粒大小，再请教下。贴完后补液换液你是怎么操作的，我基本前3天补一点点保持湿润，第四天没块。

jifengtang

回复 张杉杉 的帖子4 m# f+ z' R0 ?" T% _( w
" Z$ y( S' D$ p* i* b
培养液，血清用的什么？

张杉杉

回复 jifengtang 的帖子( |3 b2 a8 ~, ]3 R# A+ z

- f& g! a" L; t& W. n- X2 X) \培养液用的HyClone的α-MEM培养基，Gibco的血清。已经静置培养7天，第八天换液后，又静置四天，今天观察培养基颜色，没有变化。