脐带贴块法间充质干细胞培养原代细胞生长少

jifengtang

最近一直养脐带MSC，采用贴块法培养，但细胞长得不好，T175一瓶贴块约50块，只有2~3块爬出细胞，请教是什么问题？9 A& B  E; J0 q. V  C: M
& I) l$ _7 ?0 B! |0 _! r! A
具体操作：& o7 o1 Z- y( o2 s5 M7 ]. X* I
1、脐带PBS+双抗洗后处理，剥离血管。) D8 i" |2 J# F- d+ f- V
2、洗洗剪碎成2mm3左右小块。
  K2 m+ d5 h/ b3 g' R5 Z3 X3、培养瓶用培养液润洗过。
9 r$ V1 m9 Q4 G0 @! a, O4、放好块倒置培养过夜，T175补液至20ml，每5天换液一次。
# Y- T2 e* h" [) T5、培养液：DMEM+FBS+双抗。
2 @7 p% h6 |5 B2 p: V

木头1102

有可能是脐带的个体差异，或者放置时间过长；培养液如果配好之后放在4度冰箱时间长了，效果也不好。你是第几天观察到2-3块爬出细胞的，如果时间不是很长，可以在等等；如果时间挺长了，就传了吧，注意传代时细胞密度，可以把瓶里的组织块二次贴壁或者消化了，看能不能再获得点细胞。还有就是，组织块贴壁法最好只用华通氏胶。

jenny114402

我们都用皿培养，你可以试试悬浮法培养，操作简单，正常基本7，8天长出细胞吧

haibara007007

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你可以试试把脐带剪得再碎一些，多贴一些，应该会比较好，我们现在都贴很小很多块，贴三个75t，这样基本都可以爬出来

张杉杉

我也是新手，刚刚开始养脐带间充质干细胞，静置7天后观察，一个细胞都没长。不知道是脐带原因还是什么？

jifengtang

回复 木头1102 的帖子8 m8 g  p6 b, ]; h5 L; u0 n

' k6 }8 N' X1 p* _3 C. |基本是9~11天有细胞爬出，2~3块，然后一周后还是只有这2、3块有细胞，其他爬不出来。做了好几个脐带都这样。个体差异是不是和母体有关，我做的母体年龄较大，都在30岁以上？

jifengtang

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9 Q% r+ i  i) a- C3 _5 J/ ~7 O" W* Z悬浮法？是指酶解法吗？

jifengtang

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) l" a( s2 T" V/ l* U
! C* @' K, t* {# I大概多碎？我现在剪成大概芝麻粒大小，再请教下。贴完后补液换液你是怎么操作的，我基本前3天补一点点保持湿润，第四天没块。

jifengtang

回复 张杉杉 的帖子. H3 g% Y. z0 Z- e" D/ @. i

6 ?* K* \3 H. U, v培养液，血清用的什么？

张杉杉

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% c/ z) J; x+ F/ j3 b
; d; o8 ~, F/ x培养液用的HyClone的α-MEM培养基，Gibco的血清。已经静置培养7天，第八天换液后，又静置四天，今天观察培养基颜色，没有变化。