脐带贴块法间充质干细胞培养原代细胞生长少

jifengtang

最近一直养脐带MSC，采用贴块法培养，但细胞长得不好，T175一瓶贴块约50块，只有2~3块爬出细胞，请教是什么问题？
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) c5 Y1 c* g" ]) N/ U, w; m- v+ [/ r/ U具体操作：
3 y8 v, b: y* w; n( g- R4 t0 B1 c8 i1、脐带PBS+双抗洗后处理，剥离血管。# F9 f! c0 K* O' T. g  a' Y
2、洗洗剪碎成2mm3左右小块。
$ b" j  I9 I: f$ q. i$ o3、培养瓶用培养液润洗过。/ ~' q5 ?7 d0 m* r9 a9 [
4、放好块倒置培养过夜，T175补液至20ml，每5天换液一次。
& n6 e! Y, u$ A5、培养液：DMEM+FBS+双抗。% e5 y1 B" P+ z

jifengtang

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6 n# [, w% z, y: E
# B2 O3 s$ e$ H7 z- e9 V  n8 P% e' t基本是9~11天有细胞爬出，2~3块，然后一周后还是只有这2、3块有细胞，其他爬不出来。做了好几个脐带都这样。个体差异是不是和母体有关，我做的母体年龄较大，都在30岁以上？

jifengtang

回复 jenny114402 的帖子  j6 Y4 {; e& V5 C5 T4 {

. ?) H6 }  v& N/ `4 i, ^悬浮法？是指酶解法吗？

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回复 haibara007007 的帖子3 Z, g4 \9 x4 l' V9 F. x' s( W

0 o" N+ J/ T1 c, \- a2 n. X( I: ^大概多碎？我现在剪成大概芝麻粒大小，再请教下。贴完后补液换液你是怎么操作的，我基本前3天补一点点保持湿润，第四天没块。

jifengtang

回复 张杉杉 的帖子
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培养液，血清用的什么？

jifengtang

回复 zsykdx 的帖子4 {, p. c3 F$ ^" |3 b2 k
! }6 E8 @6 D) o+ x( K, Y$ I
不润瓶的话，贴块后多久开始补液，补液几次，没次多少？