间充质干细胞的慢病毒转染效率问题

liqiang8589

最近想用慢病毒过表达干细胞。 在293包病毒的时候效率高， 但是把病毒转染到干细胞的时候，却效率很低。 有哪位大神可以告诉我干细胞转染的时候注意事项或特别用的试剂。 我用的是 polybrene (8ug/ml) 转染试剂。
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yaolinzhang

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" i; J' O+ _: {$ ]需要注意的地方：1.细胞状态需要好；2.细胞接种密度，不能过密，50-60%即可；3.病毒滴度，慢病毒感染间充质的MOI大概在50左右，所以病毒滴度一定要高，这很重要；4.polybrene对细胞有毒性，注意用量

ljzmy82

可以二次转染一下，效果就好很多

lgfffancy

首先，可以肯定的是ploybrene的用量是没有问题的，我们实验室都是用的这个浓度，是没有问题的，所以可以排除polybrene的影响。其次有两个很重要的问题就是，细胞状态、密度，病毒滴度，这三个因素应该都好控制；不用灰心多试几次，一定能够成功的。

liqiang8589

回复 yaolinzhang 的帖子( a+ ]3 I9 B' O4 a4 p- M- [
  k! ~- \" i8 q4 `
我用293FT 细胞来做对照组
4 \7 B  D, h, v* D293有50%有表达GFP， 但是间充质干细胞一个都没有表达。

liqiang8589

有的论文有慢病毒转染之后用离心来提高效率，这个方法有用吗？？

yaolinzhang

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3 f2 |8 L* [. |- z* I) u+ u0 }( [, j4 N! o$ t' k) Q- x9 {
293很好感染的，但MSC就没那么容易了，估计你的病毒滴度不够，慢病毒的实验滴度很重要

liqiang8589

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2 O0 Q* G. K/ |  J* ~2 s$ I$ r# p5 i- T$ O2 R: g3 u6 u
谢谢老师
1 b) O9 j* c* X* D- e: m除了超高速离心慢病毒外有好一点的浓缩试剂盒吗？？

yaolinzhang

回复 liqiang8589 的帖子  G5 m7 t7 z- d8 d* C# r/ j% @

5 b" |4 d- P3 {* o7 J1 C9 A$ {) u你可以 去Hyclone网站上试试，不过这方面我倒没用过，建议还是买进口的

haibara007007

回复 liqiang8589 的帖子# p! ^% I: Y6 M/ K2 u
8 n  Y' I9 f, y$ s
一定要注意病毒滴度啊，用浓缩柱浓缩一下，要不转染会很费劲