NK培养 谁知道这是那个文献的呢？多谢

xuexi123

+ n( r/ o) ?) u: O' m! e% L) U3 |. @, O/ v4 h/ H9 A! i/ j
培养材料：
, ?0 J( c+ {) j% \6 E0 t% K无血清培养基GT -T551、生理盐水、淋巴细胞分离液Ficoll、人血白蛋白、自体血浆
5 U' a, I9 y% \4 t4 I9 c细胞因子：IL-2（1000IU/ml）、Anti-Human CD3（5ug/ml）、IL-12(500IU/ml）、IL-15(500IU/ml）: P# X. {# a( w$ y: q1 O6 U" Q; ^1 m# D* H* K- _
操作步骤：9 X% q/ p0 |# I5 n" k+ d7 L& s1 C& Z, Q8 y
1、采血机采集外周成分血50ml ，用生理盐水1:1进行稀释，1 v6 L' l# v' M# K! O
) f5 v  a3 w7 W1 {. k3 {0 O2、由Ficoll液分离，去红细胞，收集初步纯化的单个核细胞：经Ficoll液梯度离心分离单个核细胞，Ficoll液与待分离的单个核细胞悬液比例为3:5分离方法: 取新的50ml离心管，没管加入15mlFicoll分离液，将25ml单核细胞悬液，贴壁轻轻加入管中Ficoll液液面上，注意单个核细胞悬液的加入不能打破离心管中Ficoll液的液面，离心2000rpm/min，20min，升速1，降速0，离心后，液面分为四层，小心吸取第二层的单核细胞层，用无血清GT-T551洗涤2次，离心1800rpm/min，5min，20℃，弃去上清，再用5ml无血清培养液混悬。: [5 D) x) d7 b; V9 d% @5 e1 S4 s6 A: W
3、细胞计数：吸取约200ul的细胞悬液与1.5mlEP管内，另取一个新的EP管加入90ul台盼蓝和10ul细胞悬液，用血球计数板进计数。4 j7 Z7 M) F# i& H9 b0 x* m4 d
7 w9 M/ ?+ L  T' N  i( S  \4、将PBMC密度调整为2X106/ml，转入T75瓶中，培养基加入CD3McAb、IL-2、IL-12、IL-15，并置于培养箱中培养。每隔3d半量换液，并补充相应的细胞因子和自体血浆。6 f) n* E9 d1 m; T" K
5、收集悬浮细胞：培养第10d观察NK细胞并收获NK：将培养瓶内细胞悬液转移至50ml的离心管中，1800rpm,离心5min。去上清，用生理盐水再洗细胞2遍，最后将细胞组分混悬在100ml含1%人血清白蛋白注射用生理盐水中，转入细胞回输袋内，制成NK回输液。' H- G" i/ T* p( A; W- r) J

xblong

你这T细胞比例会很高

wozuixie

这个参考意义不大。: Q; L* P1 o0 O8 h2 C

免疫与细胞

这个参考意义不大。

yingfeixiang

回复 xuexi123 的帖子
, \6 X- S+ I6 `$ Q6 E, `" n! b( h" A. ?2 I7 h- V3 M
不是文献，是别人的总结

yingfeixiang

这个是别人发的，拷贝的吧

小沙弥敲木鱼

找到了么

飞翔的烨

回复 xuexi123 的帖子7 M2 h. A, I7 Y4 [% m, {; g

: v5 J  j6 M3 o3 w% h, }6 C9 j怎么可能这么简单

吕小松

IL-15的作用是什么？

baby00000003

也许是T－551的说明书吧？