从肿瘤组织中获取DC特异性抗原

momoenn

大虾们帮忙看看这是什么情况？- ^2 k6 y& x8 `8 x$ y% s4 I
第一次做肿瘤抗原制备。前一天临床上采集肿瘤组织后在冰箱里放置，第二天才处理，中间在-20°冰箱放置了。操作：酒精消毒1-2min，经生理盐水清洗3遍，取中间部分剪碎后，放置在细胞筛中研磨，如下图9 b9 t0 A; K5 A- f" f5 B0 k
平板里放了一些培养基。研磨后取平板里的液体显微镜下观察，并离心，分别得到以下结果。
+ ~" j) _- E9 e6 I3 j' v亲们给分析一下这是什么情况，谢谢啦！急问，在线等。

baby00000003

不太了解你这个处理方法是什么原理，可否详细解释下哩？

shunho-cell

貌似产物很少？

momoenn

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; Q. D3 E/ k2 u" [1 b7 `( t& t$ d- c; m
我现在还没处理完，后续还应该进行反复冻融，然后离心取上清得到最后产物。只是感觉现在状态不太对。

momoenn

回复 shunho-cell 的帖子* A' E5 C3 y) o6 d

$ |+ m9 I" T/ H8 M' n6 C+ W* X研磨后应该得到肿瘤细胞的单细胞悬液，现在显微镜下基本观察不到细胞形态。离心得到的沉淀为什么是红色的呢？

momoenn

回复 baby00000003 的帖子4 S) H; |8 P0 h0 N6 I( S5 o( Y  N

- S. `( u3 A* O/ `4 `研磨得到肿瘤细胞的单细胞悬液，再经42°和60°灭活。然后反复冻融得到肿瘤抗原。但是现在研磨后的液体看不到细胞形态。离心后颜色还特别红

lgfffancy

目前看，你这种方法你是想获得肿瘤细胞吧

baby00000003

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1 o2 q. d  {% x% `9 H$ }& i2 v1 o
- [6 `# d- R, U; o总之是要破碎细胞获得可溶蛋白呗～7 \: J8 ~# N, k" n. s! e- }' ^4 Z6 m5 j
干脆就操作的时候小心点别污染，给它磨碎了直接反复冻融吧，最后离心的时候，大块和难容碎片也就离掉了
' l' ?# }! A( d4 |& _/ sBCA测测蛋白浓度，调整一下初始的组织块大小，也就O了吧～

momoenn

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中间有一步关键的步骤，是水浴灭活，应该是灭活的酶的活性。如果直接磨碎反复冻融的话，是不是可能会把目的蛋白给消化了。

momoenn

回复 lgfffancy 的帖子$ T3 p" l3 i( ]% f* s9 {
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昂，得到肿瘤细胞后再反复冻融得到肿瘤抗原