从肿瘤组织中获取DC特异性抗原

momoenn

大虾们帮忙看看这是什么情况？
4 |4 J9 I9 u0 a2 ~. A第一次做肿瘤抗原制备。前一天临床上采集肿瘤组织后在冰箱里放置，第二天才处理，中间在-20°冰箱放置了。操作：酒精消毒1-2min，经生理盐水清洗3遍，取中间部分剪碎后，放置在细胞筛中研磨，如下图
3 u8 A9 y* \/ ^7 f: a, K平板里放了一些培养基。研磨后取平板里的液体显微镜下观察，并离心，分别得到以下结果。4 G; W, N4 ]0 K/ V4 v* M5 e
亲们给分析一下这是什么情况，谢谢啦！急问，在线等。

baby00000003

不太了解你这个处理方法是什么原理，可否详细解释下哩？

shunho-cell

貌似产物很少？

momoenn

回复 baby00000003 的帖子4 \4 q1 m: W- Z1 |/ E, V
8 B" P: A- u- [6 x
我现在还没处理完，后续还应该进行反复冻融，然后离心取上清得到最后产物。只是感觉现在状态不太对。

momoenn

回复 shunho-cell 的帖子
  Q! P9 j) c3 [/ k) v- T  X0 {  {# n1 u, t" H! H
研磨后应该得到肿瘤细胞的单细胞悬液，现在显微镜下基本观察不到细胞形态。离心得到的沉淀为什么是红色的呢？

momoenn

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4 o3 k% x3 l4 i; \: M1 B) t8 c2 D9 e8 o. ]. t# v" J6 H
研磨得到肿瘤细胞的单细胞悬液，再经42°和60°灭活。然后反复冻融得到肿瘤抗原。但是现在研磨后的液体看不到细胞形态。离心后颜色还特别红

lgfffancy

目前看，你这种方法你是想获得肿瘤细胞吧

baby00000003

回复 momoenn 的帖子6 {5 W/ ^  F( u9 ]6 i4 M: p
6 Q/ ?  o. @" }& [) ?
总之是要破碎细胞获得可溶蛋白呗～, w$ o6 s' x4 a0 e/ R) C+ e
干脆就操作的时候小心点别污染，给它磨碎了直接反复冻融吧，最后离心的时候，大块和难容碎片也就离掉了- B8 h* H0 x$ ^# I" o
BCA测测蛋白浓度，调整一下初始的组织块大小，也就O了吧～

momoenn

回复 baby00000003 的帖子8 G5 L) x- g$ u# _8 R

4 y; F+ B! T: r3 b' Y, n中间有一步关键的步骤，是水浴灭活，应该是灭活的酶的活性。如果直接磨碎反复冻融的话，是不是可能会把目的蛋白给消化了。

momoenn

回复 lgfffancy 的帖子0 V0 Z; h( B. P& r! @0 n

( ~( H1 ?& Z: W5 s2 ]1 R; z昂，得到肿瘤细胞后再反复冻融得到肿瘤抗原