从肿瘤组织中获取DC特异性抗原

momoenn

大虾们帮忙看看这是什么情况？
* E( u2 X+ f  t8 T% \第一次做肿瘤抗原制备。前一天临床上采集肿瘤组织后在冰箱里放置，第二天才处理，中间在-20°冰箱放置了。操作：酒精消毒1-2min，经生理盐水清洗3遍，取中间部分剪碎后，放置在细胞筛中研磨，如下图) }) z$ R! F7 ~8 b! D0 U
平板里放了一些培养基。研磨后取平板里的液体显微镜下观察，并离心，分别得到以下结果。. s- J1 {0 J  m
亲们给分析一下这是什么情况，谢谢啦！急问，在线等。

baby00000003

不太了解你这个处理方法是什么原理，可否详细解释下哩？

shunho-cell

貌似产物很少？

momoenn

回复 baby00000003 的帖子
! ^' T1 G  P3 w
2 J1 E5 x( r- K6 g4 Q我现在还没处理完，后续还应该进行反复冻融，然后离心取上清得到最后产物。只是感觉现在状态不太对。

momoenn

回复 shunho-cell 的帖子& ?0 n0 v, }% g8 E( l" g
6 {# ?/ W" T% P$ A- o% C+ x
研磨后应该得到肿瘤细胞的单细胞悬液，现在显微镜下基本观察不到细胞形态。离心得到的沉淀为什么是红色的呢？

momoenn

回复 baby00000003 的帖子
0 ~2 a6 B! n$ {  x  O. I/ y1 S; I* a% C; N8 U& \1 q/ F/ o
研磨得到肿瘤细胞的单细胞悬液，再经42°和60°灭活。然后反复冻融得到肿瘤抗原。但是现在研磨后的液体看不到细胞形态。离心后颜色还特别红

lgfffancy

目前看，你这种方法你是想获得肿瘤细胞吧

baby00000003

回复 momoenn 的帖子, r. B; ~- Y0 H  z& `5 r

7 p" H% a, I6 H( |, E) w; d8 W) d: U5 f总之是要破碎细胞获得可溶蛋白呗～
- B6 r/ I. J" i8 C0 N" Z干脆就操作的时候小心点别污染，给它磨碎了直接反复冻融吧，最后离心的时候，大块和难容碎片也就离掉了) K; F, l( G7 L5 x4 F5 i  _* \
BCA测测蛋白浓度，调整一下初始的组织块大小，也就O了吧～

momoenn

回复 baby00000003 的帖子
9 s0 n6 ?! B2 N/ _% b& b; U$ r5 q" I8 }. E/ I
中间有一步关键的步骤，是水浴灭活，应该是灭活的酶的活性。如果直接磨碎反复冻融的话，是不是可能会把目的蛋白给消化了。

momoenn

回复 lgfffancy 的帖子
+ }3 i( q9 S$ m- d1 W7 y. T: u9 }6 Q6 w5 O% Q& P% e
昂，得到肿瘤细胞后再反复冻融得到肿瘤抗原