从肿瘤组织中获取DC特异性抗原

momoenn

大虾们帮忙看看这是什么情况？6 Y* W; H. t- ~$ n& @1 t( q: ]
第一次做肿瘤抗原制备。前一天临床上采集肿瘤组织后在冰箱里放置，第二天才处理，中间在-20°冰箱放置了。操作：酒精消毒1-2min，经生理盐水清洗3遍，取中间部分剪碎后，放置在细胞筛中研磨，如下图
3 d" f2 b8 D$ G  T. |1 V1 \; x平板里放了一些培养基。研磨后取平板里的液体显微镜下观察，并离心，分别得到以下结果。( ^3 B* C8 v5 a0 J6 g) d
亲们给分析一下这是什么情况，谢谢啦！急问，在线等。

momoenn

回复 baby00000003 的帖子
( d4 f; C& s8 S$ D4 \- \: ^! X% v7 F/ x; i9 J8 w3 g) a! C" w7 S
我现在还没处理完，后续还应该进行反复冻融，然后离心取上清得到最后产物。只是感觉现在状态不太对。

momoenn

回复 shunho-cell 的帖子
  T, m5 K1 ]: F$ m: @9 k. {- p% i" }; c+ j4 [4 p# h" A7 \
研磨后应该得到肿瘤细胞的单细胞悬液，现在显微镜下基本观察不到细胞形态。离心得到的沉淀为什么是红色的呢？

momoenn

回复 baby00000003 的帖子/ V( M0 u1 T" ~% T0 b- |" Y
. A5 E% q0 N: h) \
研磨得到肿瘤细胞的单细胞悬液，再经42°和60°灭活。然后反复冻融得到肿瘤抗原。但是现在研磨后的液体看不到细胞形态。离心后颜色还特别红

momoenn

回复 baby00000003 的帖子: w& _( L1 q7 W

0 J5 x! X5 X0 |中间有一步关键的步骤，是水浴灭活，应该是灭活的酶的活性。如果直接磨碎反复冻融的话，是不是可能会把目的蛋白给消化了。

momoenn

回复 lgfffancy 的帖子* M* F3 C: ~: Y8 n

5 T) o! p, V4 h7 D. M2 p昂，得到肿瘤细胞后再反复冻融得到肿瘤抗原

momoenn

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3 i& |! E: l3 T; @' |5 y: Y+ X! E9 |) U/ F+ T
或者，有没有更好的办法让俺学习一下

momoenn

回复 baby00000003 的帖子
; g& E/ Y3 u( W1 b! R$ B
# n6 ]* k0 b8 t0 C( I8 I% j哦，谢谢

momoenn

回复 baby00000003 的帖子
; q. n/ H1 l: f: C, Z. y
5 a9 g8 \  e8 `; V2 h# ~, J% T还要诱导DC，尽量还是别加入外源蛋白吧

momoenn

回复 lgfffancy 的帖子5 g1 {9 A4 O' I
/ q9 p2 l1 ?; W+ C% T
额。死了再把它撕了吧