CAR-T细胞培养中慢病毒转染的问题

yanxm920

没有遇到过呢

木子小王令

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) R- q& B% G$ n' E. U
) o  e) B; u6 E# D! E3 N是的，感觉自己还是操作有问题。
9 T, I* I9 a9 Q7 e是别人给的培养第九天的Tcell，我每孔取了3×105接的。因为以前慢病毒转染时候一般都是在转染时细胞汇合度达30~50%，所以这回转Tcell也想当然的沿用这个规律。0 I9 C- \  x; ]  ~3 Z, j. u5 `8 ?
& k  |$ j/ l& ~' D( l0 U9 z: I5 A
请问你是在Tcell初始分离后就开始用抗体刺激吗？是不是这个时期的Tcell活力比较高呢？（我之前用的Tcell是不是有点老了？）/ }+ B5 O/ {; f1 m2 {4 u
3 [! c7 a8 Q8 w4 Z# M
铺板密度如果是10^6/ml，6孔板铺1ml就可以的吧？接种第二天做转染，然后24h后再换液？
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riverdtang

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是的，第九天转那效率肯定不会很高的，我们分离就刺激，浓度看你们所需的细胞种类和抗体质量了，这个需要摸索一下，不过你们可以长到第九天还有10%转染率，那刺激可能不是最大的问题，你可以试下分离2-3天转，可能会好些。悬浮细胞不需要铺板啊，直接转就是了，第二天换液。

木子小王令

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: D6 R5 E' D5 T0 S, G* U1 F恩恩！谢谢大神！' G9 T- u# s) r
我下次试着做个梯度，有问题还请多多指教！！！

ET生物人

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+ N( t% z$ F1 B& b2 L+ Q你们是用什么培养液的？？怎么转染率这么高，我们感染效率一直都很不稳定。

六弦七品

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+ }4 Z. s3 j6 H. _* U% K3 A  X3 @7 C9 D9 B3 X0 [; z5 N3 q
你们转染效率这么高，我们都用了RetroeNection加polybrene，还是没多少，应该是载体有问题，你们用的那种载体？

六弦七品

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" e4 }, Z1 e: L& w3 n用的CMV，最近准备换ef-1a

riverdtang

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/ l$ {  B/ T$ F2 x
  d' _* a' t. q( e! R" i5 j启动子试过没有什么明显的差别，还是转染时机影响吧，分离激活后尽早转会好些

jinhaifeng

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% A9 }! t+ c. N- s请问你们用聚凝胺了吗

只因偶然

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  K6 t' F  f6 R5 A$ p% R
/ }/ M5 s; s7 u5 f0 }你们测转染率是什么时候测的？为什么我们养的CAR-T，转染第5天后（转染第2天换液），细胞增殖速度变慢，活性下降了呢