求小鼠胚胎干细胞（E14）无饲养层培养基配方

秋槟茗

各位老师好，我养的是E14细胞，之前一直都是有饲养层培养的，现在想尝试无饲养层的培养方法，但是我们实验室没做过无饲养层的ES培养，恳请各位老师赐教Protocol，谢谢！

abcstem

回复 秋槟茗 的帖子
; ]- y4 `; U% W  G7 G, i7 p# R5 H! D& s  Y8 D9 ~1 x9 c
你想要有血清还是无血清的培养条件，有血清条件相对简单，只要你原来小鼠培养液加LIF和GSK3抑制剂就可以维持细胞自我更新。无血清的条件相对麻烦一些，主要是基础培养液比较贵，就是已经被大家用的很多的2I培养体系。

smile微微笑笑

无饲养层培养现在做的挺多的，之前有同事做IPS的，就尝试了用无饲养层的方法，主要是在瓶底铺上Matrigel，然后再培养~

秋槟茗

回复 abcstem 的帖子
, f' `" ]1 w) g
/ g' w& Z/ H8 c& T. Z老师您好，是有血清的情况下的，恳请说说具体的protocol，万分感谢，，

秋槟茗

回复 smile微微笑笑 的帖子. x0 X4 ?1 t6 H2 B+ o5 K/ F

. A; j; H: l+ c; ?' S6 e/ V老师您好，不知可否告知protocol，万分感谢，，

abcstem

回复 秋槟茗 的帖子3 Y/ |; S8 ^. r$ S
% }' G, I' Z8 U3 X) ^( V) w- g
E14是比较容易养的小鼠ES细胞株，无饲养层细胞条件下，单加LIF不足以维持其自我更新，但同时加3uM的GSK3抑制剂CHIR99021就可以维持其自我更新了。培养液就是普通的有饲养层细胞有血清小鼠ES培养液。培养皿用前可以用0.1%的gelatin包被一下。

秋槟茗

# M3 k: E+ E) p' o

6 [8 F5 x+ j7 d7 |, R  q& K回复 abcstem 的帖子" Z" s2 x/ U. _& b2 o$ R
" f0 q/ ~  _0 p
好的，谢谢，想问问你们CHIR99021用的是哪一个公司的？能否给我一些你们不用饲养层的发表了文章，拜读一下

abcstem

回复 秋槟茗 的帖子  I2 a. M/ I" U( ]6 j

4 J/ W1 m' t8 v. V+ y9 Y我现在用的是找人合成的，你可以网上查询一下。应该有不止一家公司卖这个的，象stemgent。GSK3抑制剂促进小鼠ES细胞自我更新的文章已经有很多报道了，你可以查一下应其龙发的一些文章。

秋槟茗

回复 abcstem 的帖子
6 J: `# S) l, Q7 U6 |3 }- F& A. q" c/ q
老师，您的CHIR99021是用DMSO溶解的吗？浓度？我问了好几个公司都是要用DMSO

abcstem

回复 秋槟茗 的帖子
( |, F) b* K% f( j7 n2 B5 F# q8 g; h4 }
DMSO溶解的，储存液配成10mM的，用的时候用培养液稀释10倍成1mM的工作液，（这东西单用无血清培养液稀释会析出很多，所以我一般是用加过N2B27的培养液稀释的。）最终1ml培养液加3ul工作液，这样终浓度为3uM。