求小鼠胚胎干细胞（E14）无饲养层培养基配方

秋槟茗

各位老师好，我养的是E14细胞，之前一直都是有饲养层培养的，现在想尝试无饲养层的培养方法，但是我们实验室没做过无饲养层的ES培养，恳请各位老师赐教Protocol，谢谢！

abcstem

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) w( Q! H1 b/ m8 Q+ n/ J& M+ m: Y你想要有血清还是无血清的培养条件，有血清条件相对简单，只要你原来小鼠培养液加LIF和GSK3抑制剂就可以维持细胞自我更新。无血清的条件相对麻烦一些，主要是基础培养液比较贵，就是已经被大家用的很多的2I培养体系。

smile微微笑笑

无饲养层培养现在做的挺多的，之前有同事做IPS的，就尝试了用无饲养层的方法，主要是在瓶底铺上Matrigel，然后再培养~

秋槟茗

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老师您好，是有血清的情况下的，恳请说说具体的protocol，万分感谢，，

秋槟茗

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) S: F8 I! E: T$ `* H/ B. g9 r/ O, t" v
老师您好，不知可否告知protocol，万分感谢，，

abcstem

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" j% u- T4 ^/ p( W% |E14是比较容易养的小鼠ES细胞株，无饲养层细胞条件下，单加LIF不足以维持其自我更新，但同时加3uM的GSK3抑制剂CHIR99021就可以维持其自我更新了。培养液就是普通的有饲养层细胞有血清小鼠ES培养液。培养皿用前可以用0.1%的gelatin包被一下。

秋槟茗

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; S3 H' R8 T4 M8 G/ J$ @0 K回复 abcstem 的帖子  F7 s7 O2 ?8 b

. W6 T- l& c# s( l4 P8 T* d7 L, X好的，谢谢，想问问你们CHIR99021用的是哪一个公司的？能否给我一些你们不用饲养层的发表了文章，拜读一下

abcstem

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' j' E$ @9 _: m; g" }9 \
* Z% A0 J- b" V/ C  A我现在用的是找人合成的，你可以网上查询一下。应该有不止一家公司卖这个的，象stemgent。GSK3抑制剂促进小鼠ES细胞自我更新的文章已经有很多报道了，你可以查一下应其龙发的一些文章。

秋槟茗

回复 abcstem 的帖子/ p8 E3 f$ n$ P" S" J. }# o

0 Q9 e) K% d* J老师，您的CHIR99021是用DMSO溶解的吗？浓度？我问了好几个公司都是要用DMSO

abcstem

回复 秋槟茗 的帖子4 G8 E. u2 r. E, F0 M/ Y& t

% i: w$ ^, r1 D, GDMSO溶解的，储存液配成10mM的，用的时候用培养液稀释10倍成1mM的工作液，（这东西单用无血清培养液稀释会析出很多，所以我一般是用加过N2B27的培养液稀释的。）最终1ml培养液加3ul工作液，这样终浓度为3uM。