［求助］有关T细胞培养之问题

nailute1985

最近在养T细胞，我们是从cord blood中提的PBMC，然后添加IL2 CD3/28的可溶性抗体刺激，IL2大概500IU／ml， CD3/28 300ng／ml 都是在D0天加的。 现在有几个问题像大家请教一下：
/ l/ T6 r5 e: r8 ?1 Z# r1、现在是D5，细胞增殖很不明显，而且抱团生长十分严重，基本上我吹散了之后，过10分钟左右就又开始抱团了，这正常么？（脐带血当时没有立即处理，4度放了大概20小时左右做的实验）
; X0 F/ g% q7 E6 X4 s7 y2、本来一开始打算不换液，只补液的，但是从D3开始 培养基发黄了但是细胞数没怎么变，我想还维持原来的细胞密度2*10^6／ml 所以我直接全量换液了，换完液之后补加了IL2，那这个时候我还需要CD3/28再刺激一下嘛？: Y" ]3 I/ V) b; x8 f+ k
3、D5计数，细胞数比没换液之前还少。9 @9 V  R: H8 ~
求解～

nailute1985

回复 娟姐姐 的帖子
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主要是抱团太快了，是T细胞典型的特征么？我觉得其他的悬浮细胞没有这种抱团那么快的

nailute1985

回复 娟姐姐 的帖子
1 _; }; `! x% ~# P2 S! C2 ~7 |9 c8 S6 l" H; P( c: O6 w
我都是用吹的……

nailute1985

回复 醉心科研 的帖子' x# F! s& R' T# a, i4 o
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嗯，我也觉得2*10的6稍微有点高，下次1＊10的6就可以了。其实按说应该是补液的，但是因为前几天细胞消耗培养基太快了，但是细胞不怎么增殖，我如果再补液的话，细胞密度就下降了，我还是想维持这个密度，所以我就全量换了，然后补的IL，现在的问题就是，我全量换液之后，我的CD3/28还需不需要刺激？有一种说法是：CD3/28加完之后T细胞已经是处于激活状态了，换液之后就不需要补了，还有一种说法是CD3/28可溶性抗原需要存在于培养基中持续刺激，换液的话就需要加…这两种说法我不知道哪个对。

nailute1985

嗯嗯 下次我调低点 但是现在我需要计数看看生长曲线，不吹散的话我没办法计数呀，细胞数也不知道了就

nailute1985

回复 我是传奇 的帖子* U- l. H1 o+ A7 Y

, M6 C! t$ M. s" W% Z  I5 M7 m这个是我们boss给的protocol，3/28加的量和Il2的量据说是验证过的，您说的我每天都需要调整是什么意思？细胞密度么？前几天细胞基本上是不增殖的，细胞数就是那么多，但是培养基消耗很快，如果我按1:1或者1:3补液的话会不会细胞密度太低了不利于T细胞的生长呢？而且IL2我一般是补液的时候按照培养基体积再补充的，不是每天都往里面加。还有，因为我们是做的CD3/28的可溶性抗体，我期间换了一次液，那我换液之后还需要再刺激一下么？

nailute1985

回复 我是传奇 的帖子- y. K3 h! I' m' t& X8 t, G& S
) m- W: k9 ?1 q
也就是说CD3/28刺激一下就可以了，不需要持续的刺激？我们没加自体血清，我们用的HSA: V# {9 G  u3 J2 |% f% x) ~, t

nailute1985

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) i7 d1 ~( `1 u1 \! t  \我们用的HSA，效果可能会更好吧

nailute1985

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  K0 d5 J( n. e8 a2 S8 o" p1 ZT细胞扩增不需要干扰素的/ {+ I, c# g# S. g0 L& g: F  G