［求助］有关T细胞培养之问题

nailute1985

最近在养T细胞，我们是从cord blood中提的PBMC，然后添加IL2 CD3/28的可溶性抗体刺激，IL2大概500IU／ml， CD3/28 300ng／ml 都是在D0天加的。 现在有几个问题像大家请教一下：! X8 c* l: P  E3 N+ @0 k  w
1、现在是D5，细胞增殖很不明显，而且抱团生长十分严重，基本上我吹散了之后，过10分钟左右就又开始抱团了，这正常么？（脐带血当时没有立即处理，4度放了大概20小时左右做的实验）2 R$ ]/ o) E2 m4 X/ _4 E0 @
2、本来一开始打算不换液，只补液的，但是从D3开始 培养基发黄了但是细胞数没怎么变，我想还维持原来的细胞密度2*10^6／ml 所以我直接全量换液了，换完液之后补加了IL2，那这个时候我还需要CD3/28再刺激一下嘛？+ X7 C: g5 W/ }: v& g
3、D5计数，细胞数比没换液之前还少。
5 R) w% L2 Y/ {" {! l  w求解～

娟姐姐

细胞抱团生长是正常情况

nailute1985

回复 娟姐姐 的帖子- j5 T+ B! x) O+ O1 g' }+ @2 V3 ?
3 G5 T6 c% ?2 |+ E7 J3 |# z  a8 I8 Y
主要是抱团太快了，是T细胞典型的特征么？我觉得其他的悬浮细胞没有这种抱团那么快的

娟姐姐

轻轻拍打培养瓶就散开了，悬浮生长的细胞抱团正常

nailute1985

回复 娟姐姐 的帖子
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我都是用吹的……

醉心科研

# n0 {& b- }5 R2 @

, @# j- `- M: {: ?. _* Z回复 nailute1985 的帖子
2 c  F  D4 ~. f5 K
( y1 y5 X/ U1 K4 K1 接种密度偏高
  Y9 \* l' S* O/ \( }2 前几天不需换液，实在受不了可以补因子。- K1 _! v1 K& J% J
3 前7天计数没有太大参考意义。0 n" f% P: o5 K5 t2 k8 \
4 补因子的时间与外周血培养不同，是因为脐血都是这样补法吗

nailute1985

回复 醉心科研 的帖子, p6 X: S( A% U( y0 [8 @

0 N) u* E1 y  A  e$ g) r8 @# K嗯，我也觉得2*10的6稍微有点高，下次1＊10的6就可以了。其实按说应该是补液的，但是因为前几天细胞消耗培养基太快了，但是细胞不怎么增殖，我如果再补液的话，细胞密度就下降了，我还是想维持这个密度，所以我就全量换了，然后补的IL，现在的问题就是，我全量换液之后，我的CD3/28还需不需要刺激？有一种说法是：CD3/28加完之后T细胞已经是处于激活状态了，换液之后就不需要补了，还有一种说法是CD3/28可溶性抗原需要存在于培养基中持续刺激，换液的话就需要加…这两种说法我不知道哪个对。

riverdtang

2*10^6已经接近生长密度上限了，调到1*10^6甚至5*10^5都可以，T细胞抱团生长很正常，不要吹散，成团有助于其分泌有利的生长因子

醉心科研

回复 nailute1985 的帖子9 f0 s% B0 p4 I4 `( Q

$ ^4 C4 o. Q& O, R按外周血T细胞的培养来说，不需要持续加。

nailute1985

嗯嗯 下次我调低点 但是现在我需要计数看看生长曲线，不吹散的话我没办法计数呀，细胞数也不知道了就