脐带间充质干细胞培养讨论

444352110@qq

1、脐带在去除血管和羊膜，剪碎后，组织碎片要不要洗？4 Y( Q' g% d1 A$ ]+ g- A# ?' n
2、组织贴壁法培养细胞长出来应该是每个视野窦可以看到还是个别视野可以看到？
  I! O. E' Z' T, H5 E3 s* ^3、组织贴壁法和酶消化法那个方法能够好些？4 g+ G+ f5 H% m6 k
4、对于脐带间充质干细胞培养应该选择什么样的培养基比较好？- g8 w: m$ k( o

444352110@qq

做这个我做了一批，别人做了两批，结果我做的有细胞爬出来，但是并不是每个视野都有，就像第一个问题，我的把组织块洗了，长出来了，没有洗的却没有长出来，和洗组织块有关系吗？希望和各位大神讨论一下，谢谢！

春玲子

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( h# n( h- f4 E& F1 n0 p$ w
! r* W% ]% @- j  P# d7 q( k; ~7 h首先，组织碎片需要清洗，还要检测一下无菌；
9 x4 J" F4 M5 I/ _" m9 B- X应该是每个视野都可以看到，适当的调整显微镜；5 Q+ h" y2 J) Q) e7 r1 e6 q
间充质干细胞贴壁生长是它的特性，在传代换液时需用酶将细胞消化下来进行更换换培养基，都需要这两种方法；
6 ~, j/ y6 s. w+ P4 _一般情况下是用DMEM培养基。

wuhuaguo88l

组织块是要清洗的，不洗的话，后续培养基的粘度会很高，影响细胞爬出率；爬出的细胞是一小片，一小片的，后续需要消化下来，做传代培养；组织贴壁法和酶消化法各有优缺点，网上相关材料比较多，主要根据你实验要求；培养基和血清用好一些的，会提高细胞爬出率。

444352110@qq

回复 春玲子 的帖子' p# ?( J0 K" q+ l0 Y
; J- D0 }( C& a
我做细胞确实是有爬出来，但是就是有的地方很多，有的地方却是很少，所以感觉好像哪里是不是做的不对

晗晗

碎片要洗
* g( a4 d2 Z6 K' J应该是每个视野都能看到7 h# _; m- j& l* D
虽然组织贴壁法比较慢但是细胞长的比较好，酶消化法如果是新手还是不要用这种方法，因为如果消化时间掌握不好，细胞会被破坏
; [$ I$ [" o% b+ m一般用DMEM培养基

pauldong

组织碎片最好还是洗涤一次，这样洗涤上清也好拿去检测

lgfffancy

1.组织碎片要洗+ P3 a  H0 d& c3 Y& A
2.组织块培养法由于酶消化法7 D; `0 }. t" d
不好意思 我只知道这么多哈+ n) i- Y4 R3 S& q8 ?. {

pauldong

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4 L: X; h$ b0 }3 C; r. H
+ y. z$ ~0 t* s  d1 {爬细胞根据情况，有点组织块出来的细胞快一些，有的慢一些，所以不一定每个视野都有! Z6 ?$ q2 w2 h& q( z! C
组织贴壁法个人比较推荐，细胞纯度较高，就是出细胞比较慢，酶消化法也可以，但是分离过程要长些，根据自己喜好选择
0 F5 _$ Y$ \; Y9 Y; o; `+ R间充质干细胞专用无血清培养基，加血清或血清替代物，效果很好。普通的DMEM加血清也能养出来，看你对细胞品质的追求

444352110@qq

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/ a6 D! ?* ?  S2 s
; i7 _; N" e& D, X: ]( V, r9 Z无血清培养基市面上很多，但是哪家相对较好？